[发明专利]琴叶榕叶片的组织培养基及离体再生方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，涉及一种琴叶榕叶片的组织培养基及离体再生方法。

背景技术

琴叶榕(Ficus lyrata)为桑科榕属常绿乔木，叶片厚革质，深绿色，表面具光泽，全缘，叶脉凹陷，长15-38cm，宽10-17cm，因形似小提琴而得名，原产热带非洲，可做庭园树、行道树、盆栽树；喜温暖、湿润和阳光充足环境，生长适温为25℃至35℃，15℃左右休眠，5℃以上可安全越冬；对水分的要求是宁湿勿干；对光照的适应性较强，在明亮的散射光能生长良好，夏季以避免阳光直射；对土壤的要求也不严，比较喜欢酸性，不耐瘠薄和碱性土壤。琴叶榕又称牛奶子，其根和叶有药用价值，主治祛风除湿，清热解毒，具有治疗疟疾、黄疸、痛经、乳痈、腰背酸痛、跌打损伤及消除炎症等功效。

琴叶榕耐寒性差，温度低于5℃时叶片会枯黄甚至脱落，影响其园林效果的发挥，阻碍了它向北方地区的推广和应用。要对琴叶榕进行遗传改良，增强其抗寒性，需向琴叶榕中导入抗寒基因。而建立稳定的、高效的叶片离体再生体系是进行遗传转化的重要基础的前提。琴叶榕外植体的再生技术已有一定的报道，但在其外植体再生技术的激素种类、浓度配比、叶片的具体部位、放置方式等方面值得进一步探讨。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种琴叶榕叶片的组织培养基及离体再生方法，从培养基不同的激素种类、配比、接种部位和方式以及培养条件等方面对琴叶榕叶片离体培养和不定芽再生进行优化设计，建立琴叶榕叶片离体再生体系。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明公开了一种琴叶榕叶片的组织培养基，包括愈伤组织诱导培养基、愈伤组织增殖培养基、不定芽分化培养基和生根培养基；所述愈伤组织诱导培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加有蔗糖30g/L、琼脂3.2g/L、6-苄氨基嘌呤2.0mg/L和萘乙酸0.1mg/L；所述愈伤组织增殖培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加有6-苄氨基嘌呤1.0mg/L和萘乙酸0.1mg/L；所述不定芽分化培养基是以MS培养基为基本培养基，并添加有6-苄氨基嘌呤1.0mg/L和萘乙酸0.1mg/L；所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加有吲哚-3-丁酸0.1mg/L、活性炭300mg/L、卡拉胶6.0g/L和蔗糖30g/L。

本发明还公开了一种使用上述琴叶榕叶片的组织培养基进行琴叶榕叶片离体再生的方法，包括以下步骤：

1）愈伤组织诱导：以琴叶榕叶片作为外植体，将叶片清洗消毒后，接种于所述愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，获得愈伤组织；

2）愈伤组织增殖：将愈伤组织转入所述愈伤组织增殖培养基中进行增殖培养；

3）不定芽分化：将愈伤组织接种于所述不定芽分化培养基中进行不定芽分化培养；

4）生根培养：将不定芽的小苗接种到所述生根培养基中进行生根培养；

5）试管苗移栽：将所得试管苗移栽入体积比为8:2的草炭土-珍珠岩混合基质中培养，即得琴叶榕组培种苗。

进一步，所述步骤1）中，琴叶榕叶片为带叶柄的叶片，叶片背面朝下接触培养基。

进一步，所述步骤1）～步骤4）中，培养条件为：接种后在25±2℃下，暗培养2周后在光照强度为1500～2000lx条件下培养。

本发明中所述的MS培养基和1/2MS培养基为植物组织培养中常用的基本培养基，其具体配方如下表所示：

本发明的有益效果在于：本发明从培养基不同的激素种类、配比、接种部位和方式以及培养条件等方面对琴叶榕叶片离体培养和不定芽再生进行了优化设计，建立了琴叶榕叶片离体再生体系，提高了愈伤组织的诱导率和不定芽的分化率，为基因工程改良琴叶榕使其具有抗寒性奠定了基础。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：

图1  为琴叶榕外植体叶片；

图2  为琴叶榕愈伤组织诱导；

图3  为琴叶榕愈伤组织增殖；

图4  为琴叶榕不定芽分化；

图5  为琴叶榕生根；

图6  为琴叶榕移栽。

具体实施方式

下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。