[发明专利]用于检测EGFR基因热点突变的引物、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种引物，其特征在于，所述引物序列如下：

SEQ ID NO:15’-ATCCCAGAAGGTGAGAAAGATAAAATTC-3’

SEQ ID NO:25’-CCTGAGGTTCAGAGCCATGGA-3’

SEQ ID NO:35’-AGAGCCATGGACCCCCACAC-3’

SEQ ID NO:45’-CGAAGCCACACTGACGTGC-3’

SEQ ID NO:55’-CGAAGGGCATGAGCCGC-3’

SEQ ID NO:65’-CCTCCAGGAAGCCTACGTGA-3’

SEQ ID NO:75’-CAGCCAGGAACGTACTGGTGA-3’

SEQ ID NO:85’-TCCCTGGTGTCAGGAAAATGCT-3’

SEQ ID NO:95’-CGCAGCATGTCAAGATCACAGAT-3’。

2.一种包括有权利要求1所述的引物的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：1）引物，所述引物序列如SEQ ID NO:1～SEQ ID NO:9所示，PCR MIX反应液，针对不同突变进行酶切的限制性内切酶，BSA溶液，酶切缓冲液，阴性对照品，阳性对照品，去离子水；2）分隔并集中包装这些试剂的瓶或管以及包装盒。

3.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述引物的浓度均为5～10μmol/L。

4.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述PCR MIX反应液包括Taq DNA聚合酶、dNTPs和MgCl2；其中，所述Taq DNA聚合酶的浓度为50U/ml，所述dNTPs包括dATP、dGTP、dCTP、dTTP，它们的浓度均为400μM，所述MgCl2的浓度为3mM。

5.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述限制性内切酶分别为Mse Ⅰ、BstU Ⅰ、Nla Ⅲ、Msc Ⅰ和Sau96 Ⅰ，上述限制性内切酶的浓度均为5000U/ml。

6.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述酶切缓冲液中的各组分的摩尔浓度或者质量浓度如下：500mM NaCl、1000mMTris-HCl、100mMMgCl2、0.25%Trito-X-100。

7.按照权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述阳性对照品为：EGFR19缺失型DNA，EGFR20T790M突变型DNA，EGFR21L858R突变型DNA；所述阴性对照品为：EGFR19野生型DNA，EGFR20野生型DNA，EGFR21野生型DNA。