[发明专利]甘蔗毛细管电泳DNA指纹图谱的构建及甘蔗品种资源鉴定的方法

说明书

技术领域

本发明涉及甘蔗品种资源鉴定技术，具体地说是一种甘蔗毛细管电泳DNA指纹图谱的构建及甘蔗品种资源鉴定的方法。 

背景技术

甘蔗是我国及世界重要的糖料作物。甘蔗在分类上属于禾本科甘蔗属（Saccharum）。目前，甘蔗品种资源的鉴别主要是依据外观性状。外观性状鉴别过于依赖鉴别人员的经验和感觉，主观性强，可信度较低。同时外观性状受环境影响大,也会导致鉴别错误,加之甘蔗品种的相似度越来越高,导致鉴别越来越困难。由于DNA遗传物质受环境影响小、多态性高,DNA指纹鉴定技术已成为作物品种鉴定最有效的方法，目前在甘蔗品种资源的鉴别方面也开始逐步应用。 

DNA指纹鉴定技术是利用生物体内遗传信息载体DNA对生物物种进行鉴别的方法，近年来已经被广泛地应用于植物品种资源的鉴定。目前应用于构建DNA指纹图谱的分子标记方法主要有：限制性片段长度多态性(Restriction Fragment Length Polymorphisms,RFLP)分析技术，随机扩增DNA多态性(Random Amplified Polymorphic DNA，RAPD)分析技术，扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphisms，AFLP)分析技术，简单重复序列(Simple sequence repeat，SSR)分析技术，单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，SNP)分析技术，在RAPD和RFLP技术基础上建立了序列特异性扩增区域(Sequence characterized amplified regions，SCAR)、酶切扩增多态序列(Cleaved amplified polymorphic sequence，CAPS)和DNA扩增指纹(DNA amplified fingerprints,DAF)等分析技术。其中Moore等于1991年结合PCR技术创立了SSR标记技术，SSR也称微卫星DNA,是一类由几个(多为1～6个)碱基组成的基序串联重复而成的DNA序列,其中最常见的是双核苷酸重复,每个微卫星DNA的核心序列结构相同,重复单位数目10～60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。不同遗传材料重复次数不同,导致了SSR长度的高度变异性,这一变异性正是SSR标记产生的基础。与其他分子标记技术相比，SSR具有如下优点： 

1.SSR引物是根据微卫星重复序列两端的特定短序列设计的，具有很强的特异性； 

2.SSR序列在群体中通常具有很高的多态性，而且一般为共显性； 

3.SSR重复性和稳定性好。 

毛细管电泳（Capillary Electrophoresis，CE）具有快速、灵敏、分辨率高等优点。CE可以满足SSR分析对扩增产物高分辨率的要求，分辨率可达1bp，精确展现扩增结果的多态性；CE分析得到的电泳峰可以精确的定位PCR扩增产物迁移的位置，即PCR扩增产物的大小；CE分析得到的电泳峰的峰高和峰面积可以精确的反应PCR扩增产物的量。