[发明专利]猪源衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物疫病分子生物学检测方法及检测试剂领域，具体涉及一种猪源衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物、试剂盒和检测方法。

背景技术

动物衣原体病(Chlamydiosis)是由各类衣原体(Chlamydia)感染哺乳动物、禽类等动物所发生的一类十分重要的自然疫源性传染病。该病呈地方流行，常造成很大危害及经济损失。衣原体科的最新分类研究表明，衣原体科（Chlamydiaceae）分为衣原体属（Chlamydia）和嗜衣原体属（Chlamydophila），包括沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis）、猪源衣原体(Chlamydia suis)、鼠沙眼衣原体（Chlamydia muridarum）、流产嗜衣原体(Chlamydophila abortus)、猫嗜衣原体(Chlamydophilafelis)、家畜嗜衣原体(Chlamydophila pecorum)、肺炎衣原体(Chlamydophila pneumoniae)和鹦鹉热衣原体(Chlamydophila psittaci)。感染动物的衣原体主要有6种：猪源衣原体、猫衣原体、家畜衣原体、肺炎衣原体和鹦鹉热衣原体。猪源衣原体是属于衣原体属的一个种，猪是猪源衣原体的天然宿主。目前只是从猪中分离得到，在猪的肠道样品中分离率最高。猪源衣原体对养猪业有着很大的影响。各种品系的猪都能感染猪源衣原体，并导致猪的结膜炎、肺炎或无症状亚临床感染，本病对四环素敏感。从美国爱荷华州和内布拉斯加州、意大利和比利时的农场分离出对四环素不敏感的猪源衣原体，这种稳定的耐四环素表现型与染色体中存在耐药基因有关。由此可见猪源衣原体的防控对养猪业尤为重要。从而也可以通过检测猪肉食品中是否含有猪源衣原体来进一步降低感染的可能性。

 TaqMan探针是一种寡核苷酸探针，荧光基团链接在探针的5^，末端，淬灭基团则在3，端。当探针与靶序列配对时，荧光基团发射的荧光因与3^，端的淬灭基团接近而被淬灭。在进行延伸反应时，聚合酶的5^，外切酶活性将探针切断，使得荧光基团与淬灭基团分离，发射荧光。一分子的产物生成就会伴随着一分子的荧光信号的产生。随着扩增循环数的增加，释放出来的荧光基团不断的积累。因此TaqMan探针检测的是积累荧光。目前，水解探针已被用于基因检测、病毒定量、癌细胞基因微突变检测、细胞因子基因定量等，其结果都具有高特异性与高敏感性。

    TaqMan-MGB探针是近年来的一种新型探针，它的淬灭基团是一种非荧光的淬灭基团，本身不会发生荧光，这样就降低了PCR反应荧光本底信号的强度，进一步提高了其敏感性。

中国发明专利（申请号为：200910103457.4 、200910094278、200480005196.8、201310009019.8 、201180015187.7 、201110143186.2、201110279330.5 、200910200396.3、200910200393.X 、200910094272.1、200910094279.3 等）分别公开了采用荧光定量PCR扩增技术检测病菌和动物疫病的方法。但是，目前尚无利用TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR扩增技术检测猪源衣原体(C .cuis)的试剂盒及检测方法的报道。

发明内容

为克服现有技术的不足，本发明的第一个目的是提供一种猪源衣原体TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物，第二个目的是提供使用该引物的检测试剂盒，第三个目的是提供使用上述检测用引物和试剂盒检测肉制品的检测方法。

为了实现上述第一个目的，本发明提供的猪源衣原体TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测用引物，包括猪源衣原体上游引物，其DNA序列为SEQ ID NO.1;猪源衣原体下游引物，其DNA序列为SEQ ID NO.2；猪源衣原体MGB探针，其DNA序列为SEQ ID NO.3。

为了实现上述第二个目的，本发明采用的技术方案是：猪源衣原体Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测用试剂盒包括扩增反应液管、阳性对照管、阴性对照管和灭菌去离子水管，其中：

所述扩增反应液管，管内由以下反应液组成：