[发明专利]重组蛋白质的纯化方法

说明书

本发明涉及一种重组蛋白的纯化方法,具体地，本发明涉及一种从包含重组蛋白和其相关蛋白的混合物中纯化该重组蛋白的方法，包括以下步骤：A、用处于第一电导率和pH的第一种平衡缓冲液使重组蛋白结合到离子交换介质上；B、用处于第二电导率和pH第二种平衡缓冲液继续平衡已结合蛋白的离子交换介质;C、用处于第三电导率和pH是逐步增加的洗涤液洗涤离子交换介质，洗脱下第一类相关蛋白;D、用处于第四电导率和pH的第一种洗脱液洗脱离子交换介质，洗脱下目的重组蛋白;E、用处于第五电导率和pH的第二种洗脱液继续洗脱离子交换介质，洗脱下第二类相关蛋白。该纯化方法不但提高了酸性和碱性相关蛋白去除率，而且降低了目标蛋白损失率。

技术领域

本发明属于蛋白纯化领域，更具体地，本发明涉及一种重组蛋白的纯化方法。

背景技术

离子交换层析是一种常用于蛋白质纯化的层析技术。在离子交换层析中，如果周围缓冲液的离子强度足够低，溶质表面的带电部分就被结合在层析基质上的相反电荷所吸引。通常可提高缓冲液的离子强度(电导值)与溶质竞争离子交换介质的带电位点，来实现洗脱。改变pH从而改变溶质带电荷量是实现溶质洗脱的另一种方法。导电率或pH的改变可以是逐渐的(梯度洗脱)或分步的(分步洗脱)。在过去，这些改变是渐进的，pH或导电率单向增大或减小。

目前已经有许多有关利用阳离子层析纯化蛋白的方法，例如中国专利200410068790.3公开了使用阳离子交换层析去除酸性污染物，使用提相对高电导值来去除酸性污染物，然后降低电导平衡，接着再提高电导来洗脱。pH在使用过程中不变。纯化结果为酸性突变体下降了50%左右，碱性突变体没有提及。中国专利200880119331.X公开了使用阳离子交换层析提高pH来洗涤、然后降低pH提高电导来去除抗体中的CHOP（中国仓鼠卵巢蛋白质）、脱落的蛋白A、DNA、聚体等，并没有针对抗体中的酸性、碱性相关蛋白。

上述方法虽然部分达到了纯化蛋白的目的，但存在着酸性和碱性相关蛋白去除率不高，目标蛋白损失率大的问题。

发明内容

本发明利用改变缓冲液的pH和盐的浓度来分离酸性、碱性相关蛋白和目的蛋白，在酸性低pH和相对高盐浓度的溶液条件下上样，在碱性高pH和相对低盐的溶液的条件下洗涤、洗脱。最终酸性相关蛋白的去除率大于85%，甚至高达93%，碱性相关蛋白的去除率大于59%，目标蛋白损失率小于26%。

更具体地，本发明公开了一种从包含重组蛋白和其相关蛋白的混合物中纯化该重组蛋白的方法，该方法包括依次进行的下列步骤：

A、用第一种平衡缓冲液使重组蛋白结合到离子交换介质上，其中第一种平衡液处于第一电导率和pH；

B、用第二种平衡缓冲液继续平衡已结合蛋白的离子交换介质，其中第二种平衡液处于第二电导率和pH；

C、用不同pH的洗涤液洗涤离子交换介质，从而从离子交换介质上洗脱下第一类相关蛋白，其中洗涤液处于第三电导率和pH是逐步增加的；

D、用第一种洗脱液洗脱离子交换介质，从而从离子交换介质上洗脱下目的重组蛋白，其中第一种洗脱液处于第四电导率和pH；

E、用第二种洗脱液继续洗脱离子交换介质，从而从离子交换介质上洗脱下第二类相关蛋白，其中第二种洗脱液处于第五电导率和pH。