[发明专利]一种喹诺酮类药物快速化学发光检测试剂盒及其测试方法

说明书

技术领域

    本发明涉及一种直接化学发光检测试剂盒及其测试方法，具体地说是一种动物组织、鸡蛋、蜂蜜等样本中喹诺酮类药物残留量的快速化学发光检测试剂盒及其测试方法。

背景技术

    喹诺酮类药物类药物可用于治疗呼吸道感染、泌尿生殖系统感染、消化系统感染及其它类的各种感染，还可用于抗肿瘤和抗病毒作用。除了被应用于人体的疾病治疗，还被应用到水产业上。该类药物易诱发细菌耐药性，故对生产食品动物使用的管理方式越来越严格，欧盟和北美等国家只批准恩诺沙星作为动物专用的抗菌药，诺氟沙星和环丙沙星已禁止在水产养殖业中使用。同时我国及世界卫生组织、日本等国家和组织都将喹诺酮类药物类药物列入限制使用的兽药名单，并制订出相应的最高残留限量：根据不同动物品种、组织和药物种类，最高残留限量在10-6000μg/kg之间。日本2006年5月开始实施“肯定列表制度”后，对喹诺酮类药物类药物残留的检测要求进一步提高。目前，喹诺酮类药物类药物的检测主要有微生物法（MIA)、高效液相色谱法 (HPLC)、液相色谱-串联质谱法（LC-MS)、酶联免疫法（ELISA)等。

1、微生物法（MIA)是利用抗菌药物具有的抗微生物活性，在特定的培养基上接种已知微生物，再加入被测样品或提取液，经过一定时间的培养，根据对特异微生物的抑制作用观察所含药物的抑菌效果，利用抑菌差异筛选出残留物质的种类。微生物法是日本食肉卫生检查所和各个食品检查机构检测肉食品中抗生素残留的常规筛选方法。MIA方法的灵敏度与分析者所期望的水平和规定的最高残留限量（MRL)显示出满意的结果，尽管如此，在所期望的检测水平下，阴性样品的可靠性不被保证。

2、高效液相色谱法（HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。

3、液相色谱-质谱法（LC-MQ），样品不需要衍生化处理，可对尿液、血液、肝脏、毛发和眼球样品进行检测。该方法对喹诺酮类药物的最低检测限达到1.0ng/kg，LC-MS/MS 联用，可进一步提高信噪比，所以可用于对阳性结果的确认手段。但是，无论LC-MS还是 LC-MS/MS，仪器检测法未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。

4、酶联免疫法（ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在：

1)非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度；

2)酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值，反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。

发明内容

针对上述现有技术中喹诺酮类药物的检测存在的缺陷，本发明提供一种喹诺酮类药物快速化学发光检测试剂盒及其测试方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种喹诺酮类药物快速化学发光检测试剂盒，所述的试剂盒内设有发光板、经过化学底物处理的喹诺酮类多克隆抗体、经过辣根过氧化酶标记的羊抗兔抗体、喹诺酮类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液和发光液，所述发光板上有包被抗原，该包被抗原由喹诺酮类药物半抗原与OVA采用混合酸酐法进行偶联得到，所述经过化学底物处理的喹诺酮类多克隆抗体是以诺氟沙星、氧氟沙星衍生物与OVA偶联后制成的偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔所得；

所述发光板为乳白色不透明的96孔聚苯乙烯化学发光板；

所述喹诺酮类系列标准溶液包括浓度分别为0.lng/mL、0.5ng/mL、0.8ng/mL、1ng/mL、5ng/mL和10ng/mL的喹诺酮类校准液；

所述喹诺酮类多克隆抗体在使用时按照1:10000的比例稀释；

所述经过辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体在使用时按照1:5000的比例稀释；