[发明专利]检测人类艾滋病病毒抗体的免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于人类艾滋病病毒抗体的检测技术领域，具体涉及一种检测人类艾滋病病毒抗体的免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征（Acquired Immunodeficiency Syndrome，AIDS），其病原为人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV），亦称艾滋病病毒，该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，最后罹患艾滋病。目前，艾滋病不仅已成为严重威胁我国人民健康的公共卫生问题，且已影响到经济发展和社会稳定。人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体的检测对于艾滋病的诊断和鉴别、流行病学的调查、献血员的筛选、预后判断及治疗效果的考察和药物的筛选具有重要的意义。

超顺磁性复合粒子具有良好的磁学特性，由于其受背景干扰小，特别适宜于不含磁性物质的生物样品的检测。胶体金和荧光标记分子用于测流免疫层析检测时，只可在其检测区膜表面观测到约10%的信号分子强度，而用超顺磁性复合粒子作为标记材料，则可检测到检测区膜三维立体结构中的所有磁信号分子，可极大提高灵敏度，并可用对应的磁信号检测仪达到定量测定。因此，超顺磁性复合粒子是近年来在LFIAs中受到关注的材料。

然而，目前报道的生物检测用磁性纳米复合粒子多采用化学法如共沉淀法先制备得到有机相的磁性纳米粒子后，再采用硅（SiO₂）或聚苯乙烯、聚丙烯酸、明胶等高分子材料对其表面进行稳定化包覆修饰，以得到稳定的、水溶性的磁性标记材料。但这些制备修饰方法往往较为繁琐复杂，得到的超顺磁性复合粒子在尺寸大小、生物相容性、饱和磁强度、外磁场响应速度、稳定性和标记效率等方面不能同时满足LFIAs的要求：其尺寸多大于300nm，由于磁珠颗粒偏大，在试纸上的泳动时间较慢，显色时间较长；而太小的粒子又无法提供足够的磁共振信号；另外还有生物相容性不稳定、磁珠容易聚合等问题；这些不足限制了超顺磁性复合粒子在LFIAs中的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测人类艾滋病病毒抗体的免疫层析试纸。

本发明的另一目的是提供上述免疫层析试纸的制备方法。

本发明所采取的技术方案是检测人类艾滋病病毒抗体的免疫层析试纸，包括依次连接的样品垫、硝酸纤维膜和吸水垫，所述样品垫含有超顺磁性复合粒子标记重组蛋白A；所述硝酸纤维膜包被有相互分离的检测线和质控线，所述检测线含有人类艾滋病病毒重组抗原，所述质控线含有能与所述重组蛋白A特异结合的抗重组蛋白A抗体；所述人类艾滋病病毒为人类艾滋病病毒1+2型。其中，吸水垫为样品在试纸上层析提供动力。

作为优选，所述超顺磁性复合粒子标记重组蛋白A是将重组蛋白A和超顺磁性复合粒子以肽键共价结合形成聚合体。

作为优选，所述超顺磁性复合粒子标记重组蛋白A的制备方法包括以下步骤：

a、活化磁性粒子的制备：按重量份数比，称取超顺磁性复合粒子2～3份、EDC0.5～1.5份和NHS1～3份，混匀，在35℃～40℃下反应20～40分钟，随后用缓冲液洗涤，得活化磁性粒子；

b、含有偶联后磁性粒子的反应液制备：按重量份数比，称取所述活化磁性粒子2～3份、重组蛋白A0.1～0.2份和硼砂缓冲液0.5～1份，混匀，在35℃～40℃下反应3～4小时，得含有偶联后磁性粒子的反应液；

c、取所述含有偶联后磁性粒子的反应液，加入占整个所述反应液体积0.5%～1.5%的BSA溶液，混匀，在35℃～40℃下反应20～40分钟，随后将反应得到的封闭后磁性粒子进行洗涤、悬浮，得到超顺磁性复合粒子标记重组蛋白A成品。

进一步地，所述超顺磁性复合粒子为超顺磁性Fe₃O₄纳米粒子。

由于超顺磁性复合粒子要由免疫层析试纸的样品垫泳动至硝酸纤维膜的测试区，实现抗原-抗体的特异结合和标记反应，其粒径＞300nm时，在免疫层析试纸上的泳动时间较长，显色时间慢；在偶联时较容易发生聚集，并容易产生非特异反应。若粒径太小，则磁强度又往往不够，泳动不了。因此所述超顺磁性复合粒子的粒径为60nm～300nm。优选的，所述超顺磁性复合粒子的粒径为80nm～200nm。特别优选的，所述超顺磁性复合粒子的粒径为80nm。其所述超顺磁性复合粒子粒径的偏差在10%～30%之间。优选的，所述超顺磁性复合粒子粒径的偏差在10%～20%之间。特别优选的，所述超顺磁性复合粒子粒径的偏差为15%。