[发明专利]一种来源于里氏木霉的新(R)-转氨酶及其应用

权利要求书

1.一种来源于Trichoderma reesei QM6a的新(R)-转氨酶(命名为HTR)，其特征在于：(1)其基因的核苷酸序列如SEQ NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ NO.2所示；(2)该酶在0.1mM的IPTG诱导下于25℃表达良好，最适反应pH为8.0，最适反应温度为42℃；(3)该酶具有宽广的底物谱和严格的立体选择性，可应用于手性胺和非天然氨基酸的制备。

2.含有能够编码权利要求1所述新(R)-转氨酶HTR的核苷酸序列的重组质粒或表达盒，以及能够表达权利要求1所述新(R)-转氨酶HTR的工程菌株。

3.与权利要求1所述新(R)-转氨酶HTR的氨基酸序列一致性(identity)达到85％及以上的(R)-转氨酶。

4.含有编码权利要求3所述(R)-转氨酶的核苷酸序列的重组质粒或表达盒，以及能够表达权利要求3所述(R)-转氨酶的工程菌株。

5.对权利要求1所述新(R)-转氨酶HTR进行蛋白质工程改造(氨基酸残基保守置换、氨基酸序列增长截短、合理设计、定向进化、酶的化学修饰等)所获得的(R)-转氨酶。

6.含有编码权利要求5所述(R)-转氨酶的核苷酸序列的重组质粒或表达盒，以及能够表达权利要求5所述(R)-转氨酶的工程菌株。

7.权利要求1、权利要求2、权利要求3、权利要求4、权利要求5及权利要求6所述的(R)-转氨酶、重组质粒、表达盒或工程菌株在制备手性胺和非天然氨基酸中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：生产手性胺和非天然氨基酸时，既包括采用对胺(氨基酸)消旋体的动力学拆分法，也包括采用对前手性羰基化合物加氨的不对称合成法。

9.如权利要求8所述的胺(氨基酸)消旋体，是指权利要求1所述新(R)-转氨酶HTR对其有催化活力的消旋胺(氨基酸)；最优选表3中氨基供体底物对应的胺(氨基酸)消旋体以及表4中氨基受体底物对应的胺(氨基酸)消旋体：1-苯乙胺、1-苯丙胺、1-氨基茚满、1-氨基萘满、1-(4-氟苯基)乙胺、2-戊胺、2-己胺、2-庚胺、α-氨基丙醇、DL-β-氨基丁酸、DL-α-丙氨酸、DL-α-氨基丁酸、DL-α-氨基戊酸、DL-α-半胱氨酸、DL-β-氨基丁酸乙酯、DL-β-氨基戊酸乙酯、DL-γ-氨基戊酸、4-苯基-2-丁胺。

10.如权利要求8所述的前手性羰基化合物，是指权利要求1所述新(R)-转氨酶HTR对其有催化活力的前手性羰基化合物；最优选表3中氨基供体底物对应的前手性羰基化合物以及表4中氨基受体底物：苯乙酮、苯丙酮、1-茚酮、1-四氢萘酮、4-氟苯乙酮、2-戊酮、2-己酮、2-庚酮、羟基丙酮、β-丁酮酸、丙酮酸、2-丁酮酸、2-戊酮酸、巯基丙酮酸、乙酰乙酸乙酯、丙酰乙酸乙酯、4-戊酮酸、4-苯基-2-丁酮、2-戊酮、2-己酮。