[发明专利]高通量快速测定稻米中表观直链淀粉含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于测定稻米中淀粉含量方法，具体涉及一种高通量快速测定稻米中表观直链淀粉含量的方法。

背景技术

直链淀粉含量是衡量稻米食用品质好差的一个最重要的理化指标，因而快速精准并高通量的测定稻米的表观直链淀粉含量在稻米品质改良中具有十分重要的意义。传统的稻米直链淀粉测定方法有碘比色法、电流滴定法、电压滴定法和凝胶过滤法等等。国家标准和一般实验室都采用的是标准的碘比色法（也称“常规法”）。最近几年又兴起了近红外光谱技术，包括近红外反射光谱法（NIRS）、近红外透射光谱法（NITS）等。这些技术在实际应用中各有优劣。例如传统的碘比色法具有测量结果较为精准，需要的样品量少等优点，但待测样品除前期样品处理需要出糙、精白、粉碎、过筛等多个步骤外，样品测定步骤也较为繁琐（多次用50ml容量瓶稀释定容），测定周期长，单位时间内可测定的样品数少，不适用于高通量筛选。新兴的近红外光谱技术具有不需样品前处理，检测快速无损等优点，但所需的样品量大（约25g），测量结果不很精准，且仪器设备昂贵，不能得到广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种高通量快速测定稻米中表观直链淀粉含量的方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的。这种高通量快速测定稻米中表观直链淀粉含量的方法，该方法包括如下步骤：

1)样品的制备及处理：测定前样品置于65℃烘箱4小时以上或37℃烘箱过夜；

2)样品置于2ml微量离心管称量：用美国丹佛TP-214万分之一天平称取实验样品10mg置于2ml微量离心管中，样品糊化前加20ul无水乙醇，轻轻拍打离心管，确保样品充分浸润；

3)金属浴糊化样品：接着步骤2）加入360ul1N NaOH,将样品置于95-100℃金属浴加热10-20分钟，中间轻轻拍打数次，确保样品充分糊化；

4)样品直链淀粉的测定：接着步骤3）将样品定容至2ml；再取其中的200ul糊化后的样品置于新的2ml微量离心管，加36ul1N HAC中和；加水稀释；加20ul0.2%I₂-KI染液，充分混匀，加水定容至2ml，用分光光度计测定OD620。（吸光值OD620用美国Beckman Coulter DU730紫外分光光度计测定）

更进一步的，在所述步骤1）中，所述的样品的制备及处理具体为：待测样品先用新丰牌JLGJ4.5型检验砻谷机脱壳，接着用日本KETT实验用碾米机Pearlest磨成精米，再用九阳料理机JYL-C012打磨30S；测定前样品置于65℃烘箱4小时以上或37℃烘箱过夜。

更进一步的，在所述步骤2）中，用美国丹佛TP-214万分之一天平称取实验样品10mg置于2ml微量离心管中，后期的样品糊化，一直到分光光度计测定OD620之前，这些步骤均在2ml微量离心管中进行。

在所述步骤1）、2）、3）、4）中，绘制直链淀粉含量标准曲线的4个标样由中国水稻所稻米及制品监测检验中心提供，直链淀粉含量分别为：1.5%，10.4%，16.2%和26.5%。

本发明的有益效果为：本发明大大简化了前期的样品预处理步骤，在测定过程中改用2ml的离心管替代50ml容量瓶，用金属浴代替水浴，使淀粉糊化更彻底，实验更易操作，可缩短实验周期，增加每日测定的批次和样品数。尤其适用于高通量的诱变群体中突变体的筛选。如果需要筛选的突变体与亲本之间的直链淀粉含量差异超过5%，不用测定光吸收值用肉眼即可鉴定差异。这同样适用于薯类、玉米和高粱等作物的直链淀粉含量进行高通量快速准确的测定。

具体实施方式

下面通过具体实施方式对本发明作进一步阐述，实施例将帮助更好地理解本发明，但本发明并不仅仅局限于下述实施例。

实施例1：本发明提供了一种高通量快速测定稻米中表观直链淀粉含量的方法，其步骤为：

1)样品的制备及处理：待测样品先用新丰牌JLGJ4.5型检验砻谷机脱壳，接着用日本KETT实验用碾米机Pearlest磨成精米，再用九阳料理机JYL-C012打磨30S。测定前样品置于65℃烘箱4小时以上或37℃烘箱过夜。

2)样品置于2ml微量离心管称量：用美国丹佛TP-214万分之一天平称取实验样品10mg置于2ml微量离心管中，样品糊化前加20ul无水乙醇，轻轻拍打离心管，确保样品充分浸润；