[发明专利]带HA标签的LAMP1真核表达载体及其在溶酶体分离中的应用在审
| 申请号： | 201310560452.0 | 申请日： | 2013-11-12 |
| 公开（公告）号： | CN104630263A | 公开（公告）日： | 2015-05-20 |
| 发明（设计）人： | 张磊;李红昌;杨诗涵 | 申请（专利权）人： | 中国科学院深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/66;C12N5/07 |
| 代理公司： | 深圳市科进知识产权代理事务所(普通合伙) 44316 | 代理人： | 沈祖锋;郝明琴 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | ha 标签 lamp1 表达 载体 及其 溶酶体 分离 中的 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种带HA标签的LAMP1真核表达载体，其特征在于其中所含的带HA标签的LAMP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的带HA标签的LAMP1真核表达载体，其特征在于：所述带HA标签的LAMP1真核表达载体所用真核表达载体为pcDNA3.1（+）载体。
3.权利要求1或2所述的带HA标签的LAMP1真核表达载体的构建方法，其特征在于包括如下步骤：
以Hela细胞的cDNA为模板，用SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3序列所示的特异性引物扩增得到含BamH I酶切位点及Xho I酶切位点的LAMP1-HA片段；分别对PCR扩增的LAMP1-HA基因与pcDNA3.1（+）载体使用限制性内切酶BamHI和限制性内切酶Xho I进行双酶切，纯化酶切产物；将载体和LAMP1-HA基因片段按照质量比为2.5:1-5:1的比例在DNA连接酶的作用下进行连接并转化，挑取单克隆扩大培养并提取重组质粒，通过检测，获得重组表达载体pcDNA3.1（+）-LAMP1-HA。
4.权利要求1或2所述的带HA标签的LAMP1真核表达载体应用于研究溶酶体代谢机制的分子细胞生物学技术领域。
5.权利要求1或2所述的带HA标签的LAMP1真核表达载体在溶酶体分离中的应用。
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