[发明专利]从瓯柑油胞层中分离纯化七种黄酮类化合物的方法

权利要求书

1.一种从瓯柑油胞层分离纯化七种黄酮类化合物的方法，通过以下步骤实现：

（1）溶剂萃取：取瓯柑油胞层粉末先用80%乙醇超声提取3次，固液比1:20，每次30 min，经真空抽滤后，合并上清液，在旋转蒸发仪上蒸干至无乙醇相，溶于去离子水中，依次用正己烷，氯仿，正丁醇萃取两次，分别合并两次萃取物，得到正己烷萃取物，氯仿萃取物和正丁醇萃取物；

（2）Sephadex LH-20凝胶过滤：蒸干后的正己烷和氯仿萃取物溶于40%甲醇中，上Sephadex LH-20凝胶柱，上样流速2 mL/min，上样后的Sephadex LH-20凝胶柱依次用40%，60%，80%，100%甲醇洗脱凝胶柱，每个梯度洗4 个柱床体积，洗脱流速为2 mL/min，洗脱液经HPLC检测，合并富含黄酮类化合物的洗脱液，在旋转蒸发仪上50℃蒸干得到去除色素后的黄酮粗提物；

（3）HSCCC分离纯化：配制不同的HSCCC溶剂体系，充分摇匀过夜后，上相为固定相，下相为流动相，固定相首先以20 mL/min流速泵入HSCCC，稳定后，开启逆流色谱仪将转速调至800 rpm，同时流动相以2 mL/min速度通过HSCCC，待流出液分层后，去除色素后的正己烷和氯仿萃取物分别溶于1:0.8:1:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的下相中，正丁醇萃取物溶于4:1:5的乙酸乙酯-正丁醇-水下相中，根据色谱仪检测器采集的图谱分管收集各组分，用HPLC测定各组分的组成，分别合并含有单一黄酮类化合物的试管，在旋转蒸发仪上50℃蒸干共得到七种黄酮类化合物，分别为柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素和5-去甲川陈皮素。

2.根据权利要求1所述的一种从瓯柑油胞层分离纯化七种黄酮类化合物的方法，其特征在于，黄酮类化合物的提取材料选自瓯柑油胞层。

3.根据权利要求1所述的一种从瓯柑油胞层分离纯化七种黄酮类化合物的方法，其特征在于利用正己烷、氯仿和正丁醇分段萃取瓯柑油胞层中的黄酮类化合物。

4.根据权利要求1所述的一种从瓯柑油胞层分离纯化七种黄酮类化合物的方法，其特征在于利用Sephadex LH-20凝胶柱去除正己烷和氯仿萃取物中的色素分子。

5.根据权利要求1所述的一种从瓯柑油胞层分离纯化七种黄酮类化合物的方法，其特征在于进行HSCCC纯化时，选择1:0.8:1:1的正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水的溶剂体系，从正己烷和氯仿萃取物中纯化得到甜橙黄酮、川陈皮素、橘皮素和5-去甲川陈皮素，选择4:1:5的乙酸乙酯-正丁醇-水溶剂体系，从正丁醇萃取物中得到柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷，纯化得到的七种黄酮类化合物纯度均在97%以上。