[发明专利]孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法

权利要求书

1.一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）富集有核细胞

①采全血；

②离心，收集细胞沉淀物；

③制备细胞悬液：在细胞沉淀物中加入等体积的36～38℃的RPMI1640细胞培养液，RPMI1640细胞培养液中含有质量分数为10%的胎牛血清，充分混匀制得稀释的细胞悬液；

④离心管中预置细胞分离液，加入稀释的细胞悬液于分层液面上；

细胞分离液的组成为：质量分数为9％的聚蔗糖 20～30份、质量分数为33.9％的泛影葡胺5～15份；

⑤离心，得到细胞层；

⑥吸取细胞层，转移到另一个离心管中，加入Hank^，s液，混匀、室温离心、洗涤细胞；

⑦在步骤⑥的离心管中加入等体积的平衡盐缓冲液，混匀，离心，用平衡盐缓冲液重悬细胞；

（2）母血中胎儿有核细胞筛选

⑧取步骤⑦重悬后得到的细胞悬液，加入鼠抗人的单克隆抗体试剂，充分混匀，在4℃冰箱中避光反应30分钟；

⑨离心，弃上清液，用平衡盐缓冲液洗涤，离心，弃上清液，收集细胞，分选出胎儿有核红细胞；

⑩分选得到的胎儿有核红细胞图片，进行四重形态学标准鉴定，收集符合标准的胎儿有核红细胞。

2.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤②中800g水平离心10分钟。

3.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤④中每3mL细胞分离液中加入4mL稀释的细胞悬液。

4.、如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑤中水平转子700～800g，离心20～30min。

5.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑥中Hank^，s液的加入量为核细胞层体积的5倍以上，室温400g离心10分钟。

6.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑦中平衡盐缓冲液为PBS缓冲液，400g离心10分钟。

7.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑧在细胞悬液中加入细胞悬液体积1/10的带荧光标记的鼠抗人的单克隆抗体CD45试剂。

8.如权利要求1所述的一种孕妇外周血中胎儿有核红细胞的分离方法，其特征在于：步骤⑨第一次400g离心5分钟，用平衡盐缓冲液洗涤后，再400g离心5分钟。