[发明专利]一种直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂及其制备方法

权利要求书

1.一种直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于包括以下制备步骤：

1）木葡萄糖酸醋杆菌菌泥

a、将先选育产细菌纤维素能力强的木葡萄糖醋酸杆菌，在120℃～130℃灭菌20～30分钟后的活化培养基上活化接种；活化温度20℃～60℃，活化时间24～62小时；

b、挑选单菌落在120℃～130℃灭菌20～30分钟后的种子培养基中扩大细胞培养，培养温度20℃～60℃，培养时间24～62小时；获得木葡萄糖酸醋杆菌液体菌种；

c、将木葡萄糖酸醋杆菌液体菌种在4℃～8℃，以1000g～8000g离心速率，离心10～30分钟,收集细胞，获得木葡萄糖酸醋杆菌菌泥；

2）制备菌悬液

将步骤1）获得的木葡萄糖酸醋杆菌菌泥用0.01～0.5mol/L，pH6.5～pH7.5的PBS缓冲液制备成菌悬液；

3）制备保护剂

将脱脂奶粉、海藻糖，蔗糖，乳糖，谷氨酸，甘氨酸，明胶，甘露醇分别用PBS缓冲液调制；脱脂奶粉、海藻糖，蔗糖，乳糖，谷氨酸，甘氨酸，明胶，甘露醇与PBS缓冲液的重量体积比分别为5～40%，5～20%，5～20%，5～20%，1～5%，1～5%，5～10%，1～5%；调制后获得以下八种保护剂：脱脂乳5～40%，海藻糖5～20%，蔗糖5～20%，乳糖5～20%，谷氨酸1～5%，甘氨酸1～5%，明胶5～10%，甘露醇1～5%；

4）菌悬液与保护剂混均

a、将步骤2）的菌悬液与步骤3）的保护剂以1：2～5的体积比混匀，获得菌悬液与保护剂的混合物；所述保护剂为脱脂乳5～40%，海藻糖5～20%，蔗糖5～20%，乳糖5～20%，谷氨酸1～5%，甘氨酸1～5%，明胶5～10%，甘露醇1～5%的一种或几种混合；

b、将菌悬液与保护剂的混合物放4℃～5℃冰箱1～2小时；

5）冷冻干燥

a、将步骤4）获得的菌悬液与保护剂的混合物放-18～-55℃低温冰箱冷冻2～12小时直至完全冻结;获得木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂样品；

b、将木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂样品用冻干机冷冻干燥，真空度为0.2MPa以下，干燥时间24～48小时，获得直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂。

2.如权利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于：所述活化培养基含有(NH₄)₂SO₄，MgSO₄、琼脂，以自然发酵2天的椰子水，蒸馏水，pH5.0的固体培养基；该固体培养基中液体由椰子水和蒸馏水组成，椰子水与蒸馏水体积比为9：1;所述(NH₄)₂SO₄，MgSO₄、琼脂与该固体培养基中液体的重量体积比分别为0.2%,0.05%，2%。

3.如权利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于：所述种子培养基含有蔗糖，(NH₄)₂SO₄，KH₂PO₄，MgSO₄，自然发酵5～7天的椰子水，pH4.0的液体培养基；所述该液体培养基中液体由椰子水构成；蔗糖，(NH₄)₂SO₄，KH₂PO₄，MgSO₄与椰子水的重量体积比分别为5%，0.3%，0.2%，0.05%。

4.如权利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于：所述种子培养基的培养温度为30℃，培养时间为30小时。

5.如权利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于：所述木葡萄糖酸醋杆菌液体菌种在4℃，以7000g离心速率，离心10分钟。

6.如权利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于：所述PBS缓冲液的浓度为0.01～0.5mol/L；pH为6.5～pH7.5。

7.如权利要求1所述的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，其特征在于：所述保护剂为脱脂乳10%，谷氨酸1%的一种或两种。