[发明专利]一种直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体的是涉及一种直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂及其制备方法。

背景技术

纤维素是由D-葡萄糖以β-1,4糖苷键连接而成的链状多糖高分子，是由100-15000个葡萄糖单位形成的不同聚合度的长直链结晶纤维素聚合成的微纤丝单晶实体。纤维素是和人类生活最密切的材料，也是植物光合作用的主要产物之一，广泛存在于树木，棉花等植物中，也有少量存在于细菌和个别低级动物中，如某些海洋生物被囊纲的外膜能产动物纤维素，也有些细菌能以异养方式产高纯度的胞外纤维素。能合成纤维素的微生物有醋酸菌属(Acetobacter)、土壤杆菌属(Agrobaeterium)、假单胞杆菌属(Pseudomonas)、无色杆菌属(Achromobacter)、产碱杆菌属(Alcaligcncs)、气杆菌属(Aerobacter)，固氮菌属(Azotobacter)、根瘤菌属(Rhizobium)和八叠球菌属(Sarcina)等的某些种，它们合成的纤维素统称为细菌纤维素。目前能大批量工业化生产的是醋酸菌纤维素，它是由醋酸菌属中的木葡萄糖酸醋杆菌、醋化醋杆菌(Acetobacter aceti)、产醋醋杆菌(Acetobacteracotigenum)、巴氏醋杆菌(Acetobacter pastcurianum)产生的，其中木葡萄糖酸醋杆菌是合成纤维素能力最强的细菌

木葡萄糖酸醋杆菌，根据《伯杰氏鉴定细菌手册》，它属于原核生物界细菌门下的革兰氏阴性好氧杆菌和球菌中的假单细胞菌目假单细胞菌科醋酸杆菌属。宽0.6-0.8um,长1.0-4.0um,以单个，成对或者链状存在。它的菌落外观呈圆形，不透明，突起，淡棕色，表面粗糙，大小一般在1-2mm,振荡培养呈菌丝状，静置培养在表面形成不溶性的纤维素凝胶膜（细菌纤维素）。

细菌纤维素主要应用于造纸工业、生物医学、声学器材和食品领域等。Nata de coco（NATA,椰纤果）是由木葡萄糖酸醋杆菌在液体有机基质乳菠萝，苹果渣废物，番茄汁，椰子水等表面形成的细菌纤维素，在食品领域主要应用于果冻，罐头，饮料等加工领域，也可以加入到口香糖、香肠等中改善口感和食品特性，也可作为肠衣和某些食品的骨架，是一种重要的新型食品基料。

目前椰纤果发酵厂所使用的发酵菌种主要是传统的木葡萄糖酸醋杆菌液体发酵剂，均未进行过正式鉴定。菌种一般来自于科研机构或企业相互间传送，来源复杂退化现象严重，且在使用过程中容易感染杂菌、退化、生产效率低和保质期短等缺点，对椰纤果生产的产业化程度有一定的限制。近年来，低温干燥技术发展迅速，研究开发新型木葡萄糖酸醋杆菌剂，简化发酵椰纤果产品的生产工艺，解决杂菌污染，菌种退化等现象，是目前椰纤果生产企业较迫切的需求。

发明内容

本发明的目的是提供了生产效率高、保质期长、应用时无需活化，无需扩培等预处理工作，可以直接添加到基质中进行发酵的直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂及其制备方法。

为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种直投式木葡萄糖酸醋杆菌发酵剂的制备方法，包括以下制备步骤：

1）木葡萄糖酸醋杆菌菌泥

a、将先选育产细菌纤维素能力强的木葡萄糖醋酸杆菌，在120℃～130℃灭菌20～30分钟后的活化培养基上活化接种；活化温度20℃～60℃，活化时间24～62小时；

b、挑选单菌落在120℃～130℃灭菌20～30分钟后的种子培养基中扩大细胞培养，培养温度20℃～60℃，培养时间24～62小时；获得木葡萄糖酸醋杆菌液体菌种；优选所述种子培养基的培养温度为30℃，培养时间为30小时。

c、将木葡萄糖酸醋杆菌液体菌种在4℃～8℃，以1000g～8000g离心速率，离心10～30分钟,收集细胞，获得木葡萄糖酸醋杆菌菌泥；优选所述木葡萄糖酸醋杆菌液体菌种在4℃，以7000g离心速率，离心10分钟。

2）制备菌悬液

将步骤1）获得的木葡萄糖酸醋杆菌菌泥用0.01～0.5mol/L，pH6.5～pH7.5的PBS缓冲液制备成菌悬液；

3）制备保护剂