[发明专利]一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽及其制备方法

权利要求书

1.一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽，其特征在于，它包含SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。

2.一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(i) 将脱脂小麦胚芽粉碎成脱脂麦胚粉，而后制成脱脂麦胚蛋白粉；

(ii) 将脱脂麦胚蛋白粉溶于水配置成脱脂麦胚蛋白悬液，并调节pH值8.0-8.5，加入碱性蛋白酶，在50-60 ℃进行水解反应，同时维持反应体系的pH值保持恒定，水解反应完毕后，将酶解液于沸水中灭酶10 min以上，迅速冷却，在4 ℃以8000 r/min以上的速度离心30 min以上，收集上清液，微滤除去杂质，将滤液冷冻干燥得麦胚蛋白酶解物；

(iii) 将麦胚蛋白酶解物溶于水配置成样品溶液，并使样品溶液通过固定化锌离子亲和层析柱，分别用水和含有0.1 mol/L NaCl的磷酸缓冲液进行洗脱；

  (iv) 将步骤(iii)所获磷酸缓冲液洗脱液通过大孔吸附树脂DA201-C，用水洗去盐分，再用70V/V%-80 V/V %乙醇水溶液洗脱，并收集洗脱液；

 (v) 将步骤(iv)所获洗脱液在35-55℃进行旋转蒸发、冷冻干燥，得到肽粉；

    (ⅵ) 将步骤(v)所获肽粉以反相高效液相色谱分离纯化，其中色谱条件包括：检测波长为215 nm，采用10%（v/v）的甲醇溶液作为洗脱液，收集与峰面积最大的峰对应的洗脱物冷冻干燥，获得所述麦胚蛋白源锌螯合肽。

3.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，步骤(ii)包括：将脱脂麦胚蛋白粉溶于水形成浓度为5 w/v %-10 w/v %的脱脂麦胚蛋白悬浮液，用碱调节pH值至8.0-8.5，然后加入0.024 AU/g碱性蛋白酶，在50-60 ℃条件下进行水解反应200min，同时用酸或碱维持反应体系的pH值恒定，水解反应完毕后，将酶解液于沸水浴灭酶10-15 min，迅速冷却，在4 ℃以8000-10000 r/min的转速离心30-60 min，收集上清液，将上清液以0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液经冷冻干燥后，获得麦胚蛋白酶解物。

4.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，步骤(iii)包括：将步骤(ii)所获麦胚蛋白酶解物溶于水形成浓度为10-20 mg/mL的样品溶液，再使样品溶液以1-2 mL/min的流速通过固定化锌离子亲和层析柱，并以水洗去未结合或弱结合的肽，而后以含有0.1 mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗脱出强结合肽。

5.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，步骤(iv)包括：将步骤(iii)所获磷酸缓冲液洗脱液通过大孔吸附树脂柱，并记录A_220nm，当A_220nm达到0.05时停止上样，然后用水以1-2 mL/min流速洗涤，当洗脱液的电导率与水一致时，再用70 v/v %-80 v/v %的乙醇水溶液以1-2 mL/min流速进行洗脱。

6.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，步骤(v)包括：将步骤（iv）所获洗脱液在温度45-55 ℃下进行旋转蒸发，再将浓缩组分进行冷冻干燥。

7.根据权利要求2或4所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，所述固定化锌离子亲和层析柱包括Zn-IDA-壳聚糖柱。

8.根据权利要求2或5所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，所述大孔吸附树脂包括DA201-C树脂。

9.根据权利要求2所述小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱柱包括DiamonsilC18柱。