[发明专利]一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽及其制备方法有效
申请号: | 201310573848.9 | 申请日: | 2013-11-15 |
公开(公告)号: | CN103626847A | 公开(公告)日: | 2014-03-12 |
发明(设计)人: | 朱科学;王晓萍;郭晓娜;宋珊珊;周惠明;彭伟 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C07K7/06 | 分类号: | C07K7/06;C07K7/08;C12P21/06;C07K1/22;C07K1/20 |
代理公司: | 南京利丰知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32256 | 代理人: | 王锋 |
地址: | 214122 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 小麦 胚芽 蛋白 源锌螯合肽 及其 制备 方法 | ||
技术领域
本发明特别涉及一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽及其制备方法,属于小麦精深加工技术领域。
背景技术
锌是人体不可缺少的微量元素, 锌缺乏可导致儿童生长发育不良、智力发育落后、免疫力降低等。传统的锌补充剂是无机盐和简单有机酸盐类,如硫酸锌、葡萄糖酸锌、甘草锌、柠檬酸锌等。但是研究表明它们稳定性差,吸收利用率低,并且对肠胃刺激大,不可长期服用。近年来,金属螯合肽得到了国内外学者的广泛关注。锌可与金属螯合肽形成螯合盐,并能借助肽的吸收特点和机制以螯合盐整体的形式,促进微量元素的吸收,同时又能满足机体对蛋白质的需求。
小麦胚芽是面粉加工过程中的副产物,麦胚蛋白占小麦胚芽的30%左右,蛋白含量仅次于大豆,是优质的植物蛋白。麦胚蛋白中蕴藏着许多具有生物活性的氨基酸序列,用特定的蛋白酶水解可以释放出生物活性肽。已有研究者从麦胚蛋白水解物中分离得到抗氧化多肽、血管紧张素转化酶抑制肽和钙螯合肽。但是关于利用小麦胚芽制备锌螯合肽尚未有报道。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽,其金属螯合作用强,可作为运输锌等微量元素的载体,且其与锌形成的肽-锌螯合物生物利用率高于无机锌,更易于消化吸收,能满足机体对蛋白质的需求,从而克服现有技术中的不足。
本发明的另一目的在于提供一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,其采用固定化锌离子亲和层析柱实现了对锌离子具有较强螯合作用的小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的精确有效制备。
为实现上述发明目的,本发明采用了如下技术方案:
一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽,包含SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。
一种小麦胚芽蛋白源锌螯合肽的制备方法,包括如下步骤:
(i) 将脱脂小麦胚芽粉碎成脱脂麦胚粉,而后制成脱脂麦胚蛋白粉;
(ii) 将脱脂麦胚蛋白粉溶于水配置成脱脂麦胚蛋白悬液,并调节pH值8.0-8.5,加入碱性蛋白酶,在50-60 ℃进行水解反应,同时维持反应体系的pH值保持恒定,水解反应完毕后,将酶解液于沸水中灭酶10 min以上,迅速冷却,在4 ℃以8000 r/min以上的速度离心30 min以上,收集上清液,微滤除去杂质,将滤液冷冻干燥得麦胚蛋白酶解物;
(iii) 将麦胚蛋白酶解物溶于水配置成样品溶液,并使样品溶液通过固定化锌离子亲和层析柱,分别用水和含有0.1 mol/L NaCl的磷酸缓冲液进行洗脱;
(iv) 将步骤(iii)所获磷酸缓冲液洗脱液通过大孔吸附树脂DA201-C,用水洗去盐分,再用70 v/v % - 80 v/v %乙醇水溶液洗脱,并收集洗脱液;
(v) 将步骤(iv)所获洗脱液在35-55 ℃进行旋转蒸发、冷冻干燥,得到肽粉;
(ⅵ) 将步骤(v)所获肽粉以反相高效液相色谱分离纯化,其中色谱条件包括:检测波长为215 nm,采用10 v/v %的甲醇溶液作为洗脱液,收集与峰面积最大的峰对应的洗脱物冷冻干燥,获得所述麦胚蛋白源锌螯合肽。
进一步的,步骤(ii)包括:将脱脂麦胚蛋白粉溶于水形成浓度为5 w/v %-10 w/v %的脱脂麦胚蛋白悬浮液,用碱调节pH值至8.0-8.5,然后加入0.024 AU/g碱性蛋白酶,在50-60 ℃条件下进行水解反应200 min,同时用酸或碱维持反应体系的pH值恒定,水解反应完毕后,将酶解液于沸水浴灭酶10-15 min,迅速冷却,在4 ℃以8000-10000 r/min的转速离心30-60 min,收集上清液,将上清液以0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液经冷冻干燥后,获得麦胚蛋白酶解物。
进一步的,步骤(iii)包括:将步骤(ii)所获麦胚蛋白酶解物溶于水形成浓度为10-20 mg/mL的样品溶液,再使样品溶液以1-2 mL/min的流速通过固定化锌离子亲和层析柱,并以水洗去未结合或弱结合的肽,而后以含有0.1 mol/L NaCl的磷酸缓冲液洗脱出强结合肽;
进一步的,步骤(iv)包括:将步骤(iii)所获磷酸缓冲液洗脱液通过大孔吸附树脂柱,并记录A220nm,当A220nm达到0.05时停止上样,然后用水以1-2 mL/min流速洗涤,当洗脱液的电导率与水一致时,再用70 v/v %-80 v/v %的乙醇水溶液以1-2 mL/min流速进行洗脱。
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