[发明专利]一种波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌发酵生产柔红霉素的培养基及发酵方法

权利要求书

1.一种波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌发酵生产柔红霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基的组成为：豆油或玉米油13～17ml/L、配方糖蜜15～19g/L、甘油4～7ml/L、蚯蚓粉10～15g/L、蛋白胨3～6g/L、轻质碳酸钙2～5g/L、硫酸铵3～6g/L；

所述二级种子培养基的组成为：豆油或玉米油16～20ml/L、配方糖蜜22～28g/L、甘油8～10ml/L、蚯蚓粉14～20g/L、蛋白胨6～10g/L、磷酸二氢钾0.4～0.7g/L、轻质碳酸钙4～7g/L、硫酸铵4～8g/L、氯化钠4～6g/L、氯化钾6～10g/L；

所述发酵培养基的组成为：豆油或玉米油20～25ml/L、配方糖蜜30～35g/L、甘油12～16ml/L、蚯蚓粉20～24g/L、蛋白胨10～16g/L、磷酸二氢钾0.6～0.9g/L、轻质碳酸钙6～8g/L、硫酸铵5～10g/L、氯化钠4～6g/L、氯化钾6～10g/L、硫酸镁6～9g/L、氯化铁0.2～0.6g/L、聚乙二胺0.01～0.03g/L。

2.按照权利要求1所述的培养基，其特征在于所述配方糖蜜的组成为：生物素含量为0.07～0.09%、泛酸含量为0.02～0.05%、核黄素含量为0.04～0.07%、蔗糖转化酶0.01～0.02%，其余为甘蔗糖蜜或甜菜糖蜜。

3.一种利用权利要求1或2所述的培养基发酵生产柔红霉素的发酵方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将已经培养好的波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度20～25%、pH值5～7、培养周期30～40h时转移到二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度30～35%、pH值5～7、培养周期40～50h时转移到发酵培养基中进行发酵培养，至发酵单位≥3g/L、菌体浓度30～40%、发酵周期130～140h时终止发酵。

4.按照权利要求3所述的发酵方法，其特征在于所述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基在接种培养前首先进行灭菌处理，其中

灭菌后一级种子培养基的质量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、总糖30～40g/100ml、pH5～7；

灭菌后二级种子培养基的质量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、总糖30～40g/100ml、pH5～7；

灭菌后的发酵培养基的质量要求：氨基氮50～60mg/100ml、溶磷＞60ug/ml、总糖40～50g/100ml、pH：5～6。

5. 按照权利要求3所述的发酵方法，其特征在于所述一级种子培养条件为：

1）罐压0.01～0.05MPa；

2）罐温27～29℃；

3）空气流量：发酵0～5h，空气流量控制在20～30m³/h；6h～移种：50～80m³/h；

4）搅拌转速80～100r/min；

5）pH5～7。

6. 按照权利要求3所述的发酵方法，其特征在于所述二级种子培养条件为：

1）罐压0.01～0.05MPa；

2）罐温27～29℃；

3）空气流量200～300m³/h；

4）搅拌转速100～120r/min；

5）pH值5～7。

7. 按照权利要求3所述的发酵方法，其特征在于所述发酵培养条件为：

 a 发酵培养初始pH：5～6，发酵过程中pH4～6；

 b 变温培养控制：

0～10h：培养温度25～26℃；

11～100h：27～28℃；

101h～放罐：24～25℃；

 c 搅拌和溶氧控制：

0～20h：搅拌转速控制在100～150r/min，溶氧浓度不得低于60%；

21～100h：搅拌转速控制在200～250r/min，溶氧浓度控制在20～40%；

101h～放罐：搅拌转速控制在150～200r/min，溶氧浓度控制在30%以上；

 d 罐压：罐压控制在0.04～0.06MPa。

8. 按照权利要求3所述的发酵方法，其特征在于在发酵过程中进行补料，包括补油、补水、补酸或碱和补氮源，其中

  a 补油控制：采用流加法补豆油或玉米油，

发酵前30h不用进行补油，

31h～100h：脂肪含量低于3%时，补入油；脂肪含量超过3%，则停止补油，

101h至发酵结束：脂肪含量低于1%时，补入油；脂肪含量超过1.5%，则停止补油；

b补水：

发酵前20h不用进行补水，

21h～80h：当发酵液菌体浓度＞50%，补入已灭菌的饮用水，控制菌体浓度40～50%，

81h至发酵结束：当发酵液菌体浓度＞40%，采用流加法补水，控制菌体浓度30～40%；

c补酸或碱：

发酵前20h，pH不进行控制，

发酵21h至发酵结束：如果pH＜5，选择5～10%的氢氧化钠溶液调节pH至5～6，如果pH＞6，选择20～30%的硫酸铵溶液调节pH至5～6；

d补入氮源：在发酵周期分别在30h、60h、80h和100h时补入氮源，其补入量为发酵液体积的1～1.5%，所述氮源为10%的蛋白胨和15%的蚯蚓粉的混合水溶液。