[发明专利]一种波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌发酵生产柔红霉素的培养基及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌发酵生产柔红霉素的培养基及发酵方法。

背景技术

柔红霉素是波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌的次级代谢产物，其成品主要作为一种临床一线抗癌药物，被广泛应用于肿瘤的临床治疗。

目前，国内部分企业采用传统工艺配方、三级发酵模式生产柔红霉素，其碳源主要是淀粉、葡萄糖，氮源主要是麸皮、蛋白粉等，存在的问题主要是：

1） 采用培养基配方不同，碳源与氮源的配伍比例的差别，柔红霉素的发酵单位一般在1～3g/L，导致发酵单位不稳定。

2） 柔红霉素发酵周期较长，发酵周期平均在150h。

3） 综合以上因素，导致能耗较高，柔红霉素的发酵成本高，缺乏市场竞争力。

发明内容

本发明目的就在于克服上述现有技术的缺陷，提供一种有效提高发酵单位，缩短发酵周期，同时最大限度的降低生产成本，且原辅料来源不受环境影响，保证其供应充足，实现柔红霉素稳定、高效地生产的波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌发酵生产柔红霉素的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产柔红霉素的发酵方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

    一种波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌发酵生产柔红霉素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于所述一级种子培养基的组成为：豆油或玉米油13～17ml/L、配方糖蜜15～19g/L、甘油4～7ml/L、蚯蚓粉10～15g/L、蛋白胨3～6g/L、轻质碳酸钙2～5g/L、硫酸铵3～6g/L；

所述二级种子培养基的组成为：豆油或玉米油16～20ml/L、配方糖蜜22～28g/L、甘油8～10ml/L、蚯蚓粉14～20g/L、蛋白胨6～10g/L、磷酸二氢钾0.4～0.7g/L、轻质碳酸钙4～7g/L、硫酸铵4～8g/L、氯化钠4～6g/L、氯化钾6～10g/L；

所述发酵培养基的组成为：豆油或玉米油20～25ml/L、配方糖蜜30～35g/L、甘油12～16ml/L、蚯蚓粉20～24g/L、蛋白胨10～16g/L、磷酸二氢钾0.6～0.9g/L、轻质碳酸钙6～8g/L、硫酸铵5～10g/L、氯化钠4～6g/L、氯化钾6～10g/L、硫酸镁6～9g/L、氯化铁0.2～0.6g/L、聚乙二胺0.01～0.03g/L。

    所述配方糖蜜的组成为：生物素含量为0.07～0.09%、泛酸含量为0.02～0.05%、核黄素含量为0.04～0.07%、蔗糖转化酶0.01～0.02%，其余为甘蔗糖蜜或甜菜糖蜜。

一种利用上述培养基发酵生产柔红霉素的发酵方法，其特征在于其工艺步骤为：首先将已经培养好的波塞链霉菌或天蓝淡红链霉菌母瓶发酵液接入一级种子培养基中进行一级种子培养，至菌体浓度20～25%、pH值5～7、培养周期30～40h时转移到二级种子培养基中进行二级种子培养，至菌体浓度30～35%、pH值5～7、培养周期40～50h时转移到发酵培养基中进行发酵培养，至发酵单位≥3g/L、菌体浓度30～40%、发酵周期130～140h时终止发酵。

    所述一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基在接种培养前首先进行灭菌处理，其中

灭菌后一级种子培养基的质量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、总糖30～40g/100ml、pH5～7；

灭菌后二级种子培养基的质量要求：氨基氮40～50mg/100ml、溶磷＞50ug/ml、总糖30～40g/100ml、pH5～7；

灭菌后的发酵培养基的质量要求：氨基氮50～60mg/100ml、溶磷＞60ug/ml、总糖40～50g/100ml、pH：5～6。

所述一级种子培养条件为：

1）罐压0.01～0.05MPa；

2）罐温27～29℃；

3）空气流量：发酵0～5h，空气流量控制在20～30m³/h；6h～移种：50～80m³/h；

4）搅拌转速80～100r/min；

5）pH5～7。

所述二级种子培养条件为：

1）罐压0.01～0.05MPa；

2）罐温27～29℃；

3）空气流量200～300m³/h；

4）搅拌转速100～120r/min；

5）pH值5～7。