[发明专利]基于荧光素酶标记工程菌的氟喹诺酮类药物残留检测方法

权利要求书

1.一种能够识别氟喹诺酮类药物的荧光素酶标记的基因工程菌大肠杆菌(Esherichia coli)pK12，其特征在于：该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M2013385，它是由含有recA启动子和荧光素酶报告基因的质粒pRecAlux3转化大肠杆菌K12所得。

2.一种基于荧光素酶标记基因工程菌大肠杆菌pK12的同时对11种氟喹诺酮类药物残留的检测方法，包括荧光素酶标记基因工程菌大肠杆菌pK12的构建和样品前处理步骤，其特征在于还包括如下步骤：

(1)用质粒pRecAlux3转化大肠杆菌K12，得到重组的大肠杆菌(Esherichia coli)pK12，其保藏号为CCTCC NO：M2013385；

(2)分别取牛、鸡、猪的肌肉、肝脏、肾脏及鱼肉样品用磷酸盐缓冲液提取得上清液待测，新鲜牛奶样品直接上样检测；

(3)将步骤(1)得到的重组的大肠杆菌(Esherichia coli)pK12在含25μg/mL卡那霉素的LB肉汤培养基中于26℃，250rpm恒温摇床中培养至OD₆₀₀=1，得到新鲜菌液；

(4)将步骤(3)得到的新鲜菌液与步骤(2)得到的待测样品在26℃静置孵育60min，用多功能酶标仪检测荧光量；

(5)计算诱导系数值IC，其公式为：IC=Li/Lb-1

式中IC：诱导系数；Li：样品的荧光强度；Lb：空白组织的荧光强度。

其中：

步骤(2)中的磷酸盐缓冲液按如下方法配制：称取0.523g KH₂PO₄和16.73g K₂HPO₄溶解于800mL蒸馏水中；调节pH值至8.0；定容至1L；在121℃高压蒸汽下灭菌20min，备用。

3.权利要求1所述的大肠杆菌(Esherichia coli)pK12在氟喹诺酮类药物检测方法中的应用。

4.权利要求2所述的检测方法在可食性动物产品中氟喹诺酮类药物残留检测中的应用。