[发明专利]一种判断晚期胃癌治疗疗效的试剂盒及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种判断晚期胃癌治疗疗效的试剂盒及其使用方法。

背景技术

研究表明一些microRNA（miRNA）在胃癌组织中表达水平异常，如let-7g、miR-433、miR-21、miR-106、miR-143等在胃癌组织中低表达，miR-214、miR-203、miR-574-3p等高表达。现由报道中miR-129在胃癌组织中的表达相比正常组织是低水平表达的，如Growth inhibitory effects of three miR-129family members on gastric cancer（Gene.2013Dec10;532(1):87-93）指出与正常细胞相比，miR-129在胃癌细胞中的表达下调，miR-129对胃癌细胞增殖有抑制作用；Gastric juice miR-129as a potential biomarker for screening gastric cancer（Med Oncol.2013Mar;30(1):365）指出与胃良性疾病患者相比，胃癌患者胃液中mir-129-1-3p和mir-129-2-3p表达水平显着降低。Epigenetic regulation of miR-34b and miR-129expression in gastric cancer.（Int J Cancer.2011Dec1;129(11):2600-10.）、Epigenetic repression of microRNA-129-2leads to overexpression of SOX4in gastric cancer（Biochem Biophys Res Commun.2010Apr16;394(4):1047-52）也都表明miR-129在胃癌组织中的表达是下调的。

综上所述，miR-129在胃癌组织中的表达是下调的，当治疗后miR-129上调时，表明患者预后良好。

发明内容

本发明要解决的技术问题是重新探讨microRNA-129(miRNA-129，miR-129)在胃癌组织中的表达及临床意义，并评估其在两种含铂化疗方案治疗晚期胃癌的预后判断中的价值。

发明人收集52例福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的胃癌患者肿瘤组织样本及正常对照组织，提取总RNA，应用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测候选miR-129的表达水平，并结合临床病理资料分析其在晚期胃癌预后判断中的意义。

试验结果显示miR-129在胃癌组织中表达水平显著高于正常胃组织(P<0.001)；miR-129的表达水平与既往治疗史比较差异有统计学意义(P=0.014)；与年龄、性别、肿瘤TNM分期、肿瘤大小、组织分化类型的差异均无统计学意义。二疗程后疗效与晚期胃癌患者总生存时间明显相关，疗效为PR、SD、PD的患者中位生存时间分别为8.41(5.29-11.52)、10.16(7.19-13.14)和5.10(3.11-7.08)个月。miR-129高表达水平患者与低表达水平患者中位生存时间分别为6.27(5.17-7.37)、8.74(6.71-10.77)个月，差异有统计学意义(P=0.026)。Cox模型分析显示miR-129高表达胃癌患者死亡风险HR为miR-129低表达胃癌患者的2.77倍(95%CI：1.12-6.87，P=0.028)；SD、PD患者的死亡风险HR分别为PR患者的0.95(95%CI：0.351-2.562，P=0.85)和6.02倍(95%CI：1.683-21.57，P=0.009)。

根据上述试验结果，发明人设计了一种判断晚期胃癌治疗疗效的试剂盒，其由三个独立包装或组合包装的试剂盒组成：RNA提取试剂盒、RT-PCR反应试剂盒和实时定量PCR反应试剂盒，依次使用三个试剂盒能检测出胃癌组织中miR-129的含量，miR-129含量相比治疗前下调，说明预后好。

RNA提取试剂盒含有2ml的消毒离心管，1.5ml二甲苯，1.5ml无水乙醇蛋白酶K50μl，Trizol试剂1ml、氯仿200ul、异丙醇500ul、显色剂1ul、75%乙醇1ml和无核酸酶水10-50ul。