[发明专利]一种同时测定人血清氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白的化学发光成像免疫分析方法

权利要求书

1.一种同时检测血清样品中多种氧化脂蛋白含量的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于包含以下步骤：

步骤1：在硅烷化修饰的载玻片阵列上，包被捕获抗体，温育、洗涤、封闭，制成固相抗体；

步骤2：向步骤1制备的固相抗体的微孔中加入相应的标准系列溶液，温育、洗涤；加入相应的辣根过氧化物酶标记的抗体，温育、洗涤；然后加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢，通过CCD进行化学发光图像的检测；根据标准溶液浓度及对应的化学发光强度值绘制标准曲线；

步骤3：向步骤1制备的固相抗体的微孔中加入相应的待测血清样品，温育、洗涤，加入相应的辣根过氧化物酶标记的抗体，温育、洗涤；然后加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢，通过CCD进行化学发光图像的检测；根据步骤2绘制的标准曲线，计算出样品中不同氧化脂蛋白的浓度。

2.根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，步骤1中所述的捕获抗体为兔抗人氧化低密度脂蛋白抗体。

3.根据权利要求2所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，所述兔抗人氧化低密度脂蛋白抗体的浓度为0.33μg/mL。

4.根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，所述的多种氧化脂蛋白为氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白。

5.根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，步骤2中所述的标准系列溶液为新鲜混合血清原液及其倍比稀释溶液。

6.根据权利要求5所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，新鲜混合血清原液中氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白的含量由纯化的Cu²⁺氧化的脂蛋白（a）和Cu²⁺氧化的低密度脂蛋白标定。

7.根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，步骤2和3中所述的辣根过氧化物酶标记的抗体分别为辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白（a）单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白B多克隆抗体。

8.根据权利要求7所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白（a）单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记的载脂蛋白B多克隆抗体的稀释度均为1：100。

9.根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，步骤1中封闭所使用的封闭液为含10%胎牛血清的0.01M磷酸盐缓冲液，pH 7.4；步骤1、2、3中洗涤所使用的洗涤液均为pH 7.4，0.01M磷酸盐缓冲液。

10.根据权利要求1所述的化学发光成像免疫分析方法，其特征在于，步骤2和步骤3中第一步温育反应的时间为1h，第二步温育反应的时间为1.5h。