[发明专利]一种同时测定人血清氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白的化学发光成像免疫分析方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析技术领域，具体说是一种同时测定人血清氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白的化学发光成像免疫分析方法。

背景技术

氧化脂蛋白目前被认为是动脉粥样硬化（As）、心血管疾病发生发展的重要因素。氧化脂蛋白（a）[ox-Lp（a）]和氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）均可通过清道夫受体途径，引起巨噬细胞内胆固醇酯的蓄积，导致泡沫细胞的形成；还可直接被巨噬细胞所吞噬摄取。同时，ox-Lp（a）和ox-LDL可通过刺激单核细胞合成、分泌黏附分子，促进单核细胞聚集、黏附至血管内皮，进而转变为巨噬细胞。此外，ox-Lp（a）和ox-LDL还可刺激氧自由基的产生，损伤血管内皮的通透性。

ox-LDL、ox-Lp(a)均可在血清中测出。ox-LDL水平在多种疾病如冠状动脉疾病CAD)、颈动脉粥样硬化、移植伴随的动脉硬化、接受血液透析的病人以及糖尿病等中升高。动脉粥样硬化病变的ox-LDL定量分析显示，在损伤部位有大量的ox-LDL蓄积。在一种疾病的不同阶段ox-LDL的水平也会改变，在急性心肌梗死、脑梗死、经皮冠状动脉腔内成形术的急性期ox-LDL水平会升高。研究表明循环ox-LDL是CAD发生的强预测因子，且与急性冠脉综合征（ACS）的病变程度呈正相关。在高血压人群、肾病血透患者和高发心血管疾病的类风湿患者中，ox-Lp(a)水平均升高。ox-Lp(a)水平在CAD患者中明显升高，且与As的病变程度相关，而ACS患者变化尤为显著，提示在CAD患者中，ox-Lp(a)的检测能较敏感地反映血脂的异常。上述说明ox-LDL、ox-Lp(a)的联合测定对于As性疾病的预测具有重要意义。

目前，检测循环ox-LDL和ox-Lp(a)的含量最常用的方法是酶联免疫吸附法（ELISA）。Ox-LDL浓度还可通过化学发光酶免疫法测定。ox-Lp(a)水平的检测分别建立了采用针对氧化apo(a)和/或apoB的特异性抗体为包被抗体，酶标抗apo(a)为检测抗体的ELISA法，测定Lp(a)中的apo(a)和/或氧化apoB位点的氧化水平，以评估Lp(a)的氧化程度。然而，上述检测方法在单个分析流程中仅能检测单一组分、分析时间长、灵敏度低、线性范围窄，且国外ox-LDL试剂盒昂贵，不易于临床推广。化学发光免疫分析将化学发光测定技术与免疫分析结合，因其具有灵敏度高、线性范围宽、分析速度快等优点而被广泛用于临床诊断、食品安全、环境监测等领域。近年来，化学发光免疫分析与成像技术联用，形成一种更新的分析技术——化学发光成像免疫分析。这种技术是将化学发光免疫反应所释放的能量通过电荷偶合装置(CCD)，以积分的形式用高分辨率的相机拍摄下来。目前，基于化学发光成像的模式在多组分免疫分析领域得到了广泛的关注。

发明内容

本发明的目的在于利用化学发光免疫分析的原理，提供一种同时检测血清样品中多种氧化脂蛋白含量的化学发光成像免疫分析方法。尤其涉及一种可同时测定血清样品中氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白含量的化学发光成像免疫分析方法。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种同时检测血清样品中多种氧化脂蛋白含量的化学发光成像免疫分析方法，包含以下步骤：

步骤1：在硅烷化修饰的载玻片阵列上，包被捕获抗体，温育、洗涤、封闭，制成固相抗体；

步骤2：向步骤1制备的固相抗体的微孔中加入相应的标准系列溶液，温育、洗涤；加入相应的辣根过氧化物酶标记的抗体，温育、洗涤；然后加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢，通过CCD进行化学发光图像的检测；根据标准溶液浓度及对应的化学发光强度值绘制标准曲线；

步骤3：向步骤1制备的固相抗体的微孔中加入相应的待测血清样品，温育、洗涤，加入相应的辣根过氧化物酶标记的抗体，温育、洗涤；然后加入化学发光底物鲁米诺-过氧化氢，通过CCD进行化学发光图像的检测；根据步骤2绘制的标准曲线，计算出样品中不同氧化脂蛋白的浓度。

在本发明的具体实施例中，步骤1所述的捕获抗体为兔抗人氧化低密度脂蛋白抗体。

作为优选，兔抗人氧化低密度脂蛋白抗体的浓度为0.33μg/mL。

作为优选，所述的多种氧化脂蛋白为氧化脂蛋白（a）和氧化低密度脂蛋白。

在本发明的具体实施例中，步骤2所述的标准系列溶液为新鲜混合血清原液及其倍比稀释溶液。