[发明专利]骨髓细胞培养终止液及应用

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，特别涉及一种医学检验领域中用于染色体核型分析的骨髓细胞培养终止液及应用。

 

背景技术

G显带因为染色体主要是被Giemsa染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪70年代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（Q带、G带、C带、R带、T带），G带是目前被广泛应用的一种带型。

研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用Giemsa染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。

近年来，随着分子生物学与细胞遗传学的发展，骨髓染色体核型分析在血液系统疾病的诊断、治疗和预后中发挥了越来越重要的作用。骨髓染色体的制备因骨髓中有大量脂肪颗粒的干扰, 骨髓中各种细胞系的细胞周期不固定, 不统一, 难以区别对待而使得骨髓染色体分裂指数低, 染色体短粗, 分散度差，且成本较高。

因此，建立一种具有分裂相多、分散度好、带纹清晰、长度适中等特征的骨髓G带制作方法尤为重要。

 

发明内容

为了克服现有技术中的存在的问题，本发明提供了一种骨髓细胞培养终止液，包括溴化乙锭和秋水仙胺，其中，溴化乙锭浓度为1.5～5.5mg/ml，秋水仙胺浓度为8～15μg/ml。

进一步地，溴化乙锭浓度为3mg/ml，秋水仙胺浓度为12μg/ml。

进一步地，溴化乙锭的配制方法如下：

a. 配制储藏液（9mg/ml）

在100ml蒸馏水中加入0.9g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温；

b. 配制工作液（3mg/ml）

储藏液以1：2（EB:ddH₂O）的比例稀释成浓度为3mg/ml的工作液。

进一步地，秋水仙胺的配制方法如下：

a.配制储藏液（120μg/ml）

称取12 mg秋水仙胺，加入8.5g/L NaCl溶液100mL，待完全溶解后，经5.516×10⁴Pa（81bf/in2）15min高压蒸汽灭菌后避光保存于4℃冰箱中； 

b.配制工作液（12μg/ml）

取120μg/ml秋水仙胺溶液1mL加入8.5g/L NaCl溶液9mL即为12μg/ml的工作液。

本发明还提供了所述的骨髓细胞培养终止液在骨髓染色体标本制作中的应用，以培养基用量为5ml计，向培养基中加入50μl的溴化乙锭和25μl的秋水仙胺。

进一步地，将溴化乙锭和秋水仙胺加入培养基，摇晃均匀后37℃，5.0%CO₂培养箱孵育1小时。

本发明的有益效果是：在终止细胞培养时加入一定量的溴化乙锭（EB）可以使染色体长度增加，使分裂相中染色体的长度更长，带纹更加清晰，具有省时、省力的优势，且准确性更高，在医学检验领域具有更广泛的应用前景。

附图说明

图1是利用实验组1所得染色体标本镜检结果。

图2是利用实验组2所得染色体标本镜检结果。

图3是利用实验组3所得染色体标本镜检结果。

图4是利用对照组所得染色体标本镜检结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。

实施例 1 配制骨髓细胞培养终止液

骨髓细胞培养终止液包括1.5～5.5mg/ml的溴化乙锭和8～15μg/ml的秋水仙胺。

其中所述溴化乙锭和秋水仙胺的配制方法可以采用本实施例所述的方法，也可以采用本领域其它的方法配制。

A 配制溴化乙锭

a.配制储藏液（浓度为9mg/ml）

在100ml蒸馏水中加入0.9g溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

b.配制工作液（浓度为3mg/ml）

储藏液以1：2（EB:ddH₂O）的比例稀释成浓度为3mg/ml的工作液。

B配制秋水仙胺