[发明专利]高效全血基因组DNA提取方法

权利要求书

1.一种高效全血基因组DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）按全血：红细胞裂解液=1：1的体积比，向EP管中的全血中加入红细胞裂解液，涡旋2分钟后静置5分钟以上，直至溶液澄清透明，然后对溶液进行离心分离，转速为4000转/分钟，离心时间为2分钟，弃去上清液；

（2）向步骤（1）的EP管中再加入占全血体积1/3的红细胞裂解液，涡旋1分钟，直至沉淀完全散开，然后对溶液进行离心分离，转速为4000转/分钟，分离时间为1分钟，弃去上清液；重复本步骤一次，并用吸水纸吸干残留液体；

（3）向步骤（2）的EP管中加入占全血体积1/3的白细胞稀释液，另加入占全血体积1/600的蛋白酶K，混匀，37^oC水浴60-90分钟，直至沉淀完全溶解；

（4）向步骤（3）的EP管中分别加入占全血体积1/12的5摩尔/升氯化钠溶液和占全血体积2/3的氯仿，充分摇匀，然后对溶液进行离心分离，离心转速为12000转/分钟，离心时间为5分钟，将上层液体转移至另一洁净的EP管中；

（5）向步骤（4）的洁净的EP管中加入占管内溶液1／10体积的醋酸铵溶液和2倍体积的冰乙醇，充分摇匀，沉淀DNA，然后对溶液进行离心分离，离心分离的转速为4000转/分钟，分离时间为1分钟，弃去上清液；

（6）向步骤（5）的洁净的EP管中加入占全血体积1/3的75%乙醇，对DNA沉淀洗涤，然后进行离心分离，转速为12000转／分，离心时间为1分钟，弃去上清液；重复本步骤两次；

（7）将步骤（6）的洁净的EP管倒立放置在放有吸水纸的水平实验台上，自然干燥5分钟；

（8）向步骤（7）的洁净的EP管中加入与全血同等体积的TE缓冲液，溶解DNA沉淀。

2.如权利要求1所述的高效全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述红细胞裂解液中各组分的配方为：

Tris-HCl (PH7.6或8.0)          0.01M

Sucrose                         320mM

MgCl₂                                                           5mM

Triton×100                       1%。

3.如权利要求1所述的高效全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述白细胞裂解液中各组分的配方为：

Tris-HCl (PH7.6或8.0)          0.01M

EDTA (PH8.0)                    4mM 

SDS                             0.2%

NaCl                            50mM。

4.如权利要求1所述的高效全血基因组DNA提取方法，其特征在于，所述TE缓冲液中各组分的配方为：

Tris-HCl (PH7.6或8.0)           1M

EDTA (PH8.0)                   0.5M。