[发明专利]一种六胜肽的液相分段合成方法

权利要求书

1.一种六胜肽的液相分段合成方法，其特征在于它由下述步骤组成：

（1）合成AcOSu

将N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚与二氯甲烷按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入二异丙基乙胺，搅拌，冰浴降温至0～5℃，滴加乙酰氯，保持溶液温度小于20℃，N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚与二异丙基乙胺、乙酰氯的摩尔比为1:1.1～1.5:1.05～1.5，滴加完后撤去冰浴，自然升至室温反应2～3小时，分离纯化产物，得到AcOSu；

（2）合成Ac-Glu(OtBu)-OH

将AcOSu与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:4～6mL混合，室温搅拌至溶解；将γ-叔丁酯谷氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到AcOSu的四氢呋喃溶液或AcOSu的1,4-二氧六环溶液中，AcOSu与γ-叔丁酯谷氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.3:1.5～3，蒸馏水与四氢呋喃或1,4-二氧六环的体积比为2～3:1，室温搅拌反应5～8小时，反应液减压浓缩至粘稠状，冷却至5～10℃，用质量分数为20%的柠檬酸水溶液调节pH值至2～3，5～10℃静置2～3小时，过滤，滤饼经水洗、干燥，得到Ac-Glu(OtBu)-OH；

（3）合成Ac-Glu(OtBu)-COOSu

将Ac-Glu(OtBu)-OH与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚，室温搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac-Glu(OtBu)-OH与N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.5:1.2～1.5，室温搅拌反应5～6小时，过滤除去固体不溶物，得到Ac-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液；

（4）合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH

将γ-叔丁酯谷氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤（3）得到的Ac-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液中，Ac-Glu(OtBu)-OH与γ-叔丁酯谷氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3，蒸馏水与四氢呋喃或1,4-二氧六环的体积比为1～2:1，室温搅拌反应8～10小时，分离纯化产物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH；

（5）合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu

将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚，室温搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH与N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.5:1.2～1.5，室温搅拌反应5～6小时，过滤除去固体不溶物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液；

（6）合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-OH

将蛋氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤（5）得到的Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液中，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH与蛋氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3.0，蒸馏水与四氢呋喃或1,4-二氧六环的体积比为1:1～2，室温搅拌反应8～10小时，分离纯化产物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-OH；

（7）合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-COONp

将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-OH与二氯甲烷按质量-体积比为1g:8～10mL混合，室温搅拌至溶解，加入对硝基苯酚，搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-OH与对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.2～1.5，室温反应6～8小时，分离纯化产物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-COONp；

（8）合成Fmoc-Gln(Trt)-COOSu

将Fmoc-Gln(Trt)-OH与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:8～10mL混合，室温搅拌至溶解，加入N-羟基丁二酰亚胺，搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Fmoc-Gln(Trt)-OH与N-羟基丁二酰亚胺、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.3:1.2～1.5，室温反应5～8小时，过滤除去固体不溶物，得到Fmoc-Gln(Trt)-COOSu的四氢呋喃溶液或Fmoc-Gln(Trt)-COOSu的1,4-二氧六环溶液；

（9）合成Fmoc-Gln(Trt)-Arg-OH

将精氨酸与碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤（8）得到的Fmoc-Gln(Trt)-COOSu的四氢呋喃溶液或Fmoc-Gln(Trt)-COOSu的1,4-二氧六环溶液中，Fmoc-Gln(Trt)-OH与精氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3.0，蒸馏水与四氢呋喃或1,4-二氧六环的体积比为1:1～3，室温搅拌反应10～12小时，分离纯化产物，得到Fmoc-Gln(Trt)-Arg-OH；

（10）合成H₂N-Gln(Trt)-Arg-OH

将Fmoc-Gln(Trt)-Arg-OH与二氯甲烷按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，搅拌，加入哌啶或二乙胺，Fmoc-Gln(Trt)-Arg-OH与哌啶或二乙胺的摩尔比为1:3～5，室温搅拌反应20～24小时，分离纯化产物，得到H₂N-Gln(Trt)-Arg-OH；

（11）合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-OH

将步骤（7）得到的Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-COONp与N,N-二甲基甲酰胺按质量-体积比为1g:6～8mL混合均匀，加入步骤（10）得到的H₂N-Gln(Trt)-Arg-OH，室温搅拌至溶解；将碳酸氢钠溶于蒸馏水中，所得溶液滴加到H₂N-Gln(Trt)-Arg-OH与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-COONp的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-COONp与H₂N-Gln(Trt)-Arg-OH、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3，N,N-二甲基甲酰胺与蒸馏水的体积比为3～5:1，室温搅拌反应20～24小时，分离纯化产物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-OH；

（12）合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-Arg-NH₂

将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-OH与N,N－二甲基甲酰胺按质量-体积比为1g:10～12mL混合，室温搅拌至溶解，依次加入二环己基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、H-Arg-NH₂·2HCl、N-甲基吗啉，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-OH与二环己基碳二亚胺、1-羟基苯并三唑、H-Arg-NH₂·2HCl、N-甲基吗啉的摩尔比为1:1.2～1.5:1.2～1.5:1.5～2:5～10，室温搅拌36～48小时，分离纯化产物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-Arg-NH₂；

（13）制备六胜肽

将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-Arg-NH₂加入二氯甲烷与三氟乙酸的体积比为1:1的混合液中，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-Arg-NH₂与混合液的质量-体积比为1g:10～16mL，室温搅拌至溶解，加入三异丙基硅烷，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg-Arg-NH₂与三异丙基硅烷的摩尔比为1:5～10，室温搅拌反应4～6小时，分离纯化产物，得到六胜肽。