[发明专利]一种六胜肽的液相分段合成方法

说明书

技术领域

本发明属于化妆品技术领域，具体涉及到多肽类中的短肽的合成方法。

背景技术

六胜肽是一种含有六个氨基酸的活性多肽，氨基酸序列为Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH₂，具有皮肤除皱的生物活性，广泛用于各种高级美容化妆品中。

目前，六胜肽的合成方法主要采用经典固相法合成。即将保护氨基酸由C端向N端逐个延伸，通过缩合、脱除保护、再缩合、切割树脂、离心、冻干和高效液相制备得到纯度高于90%的六胜肽产品。该方法中所需要的树脂市场价格较为昂贵，且其交换活度小，并且在合成中使用的溶剂种类多、且反应试剂量均明显过量，造成了六胜肽原料成本的增高。作为化妆品原料，目前六胜肽的市场价格大约为1000元/g，致使含有六胜肽的化妆品成品价格昂贵，使普通人群难以接受，因此，降低六胜肽生产成本的工艺方法研究具有重要意义。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述六胜肽固相合成方法的缺点，采用液相合成方法提供一种工艺方法简单、产品成本低、溶剂易于回收、对环境友好的六胜肽的合成方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：

1、合成AcOSu

将N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚与二氯甲烷按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入二异丙基乙胺，搅拌，冰浴降温至0～5℃，滴加乙酰氯，保持溶液温度小于20℃，N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚与二异丙基乙胺、乙酰氯的摩尔比为1:1.1～1.5:1.05～1.5，滴加完后撤去冰浴，自然升至室温反应2～3小时，分离纯化产物，得到AcOSu。

2、合成Ac-Glu(OtBu)-OH

将AcOSu与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:4～6mL混合，室温搅拌至溶解；将γ-叔丁酯谷氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到AcOSu的四氢呋喃溶液或AcOSu的1,4-二氧六环溶液中，AcOSu与γ-叔丁酯谷氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.3:1.5～3，蒸馏水与四氢呋喃或1,4-二氧六环的体积比为2～3:1，室温搅拌反应5～8小时，反应液减压浓缩至粘稠状，冷却至5～10℃，用质量分数为20%的柠檬酸水溶液调节pH值至2～3，5～10℃静置2～3小时，过滤，滤饼经水洗、干燥，得到Ac-Glu(OtBu)-OH。

3、合成Ac-Glu(OtBu)-COOSu

将Ac-Glu(OtBu)-OH与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚，室温搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac-Glu(OtBu)-OH与N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.5:1.2～1.5，室温搅拌反应5～6小时，过滤除去固体不溶物，得到Ac-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液。

4、合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH

将γ-叔丁酯谷氨酸和碳酸氢钠溶解于蒸馏水中，所得溶液滴加到步骤3得到的Ac-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液中，Ac-Glu(OtBu)-OH与γ-叔丁酯谷氨酸、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.0～1.2:1.5～3，蒸馏水与四氢呋喃或1,4-二氧六环的体积比为1～2:1，室温搅拌反应8～10小时，分离纯化产物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH。

5、合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu

将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH与四氢呋喃或1,4-二氧六环按质量-体积比为1g:8～10mL混合均匀，加入N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚，室温搅拌至溶解，加入二环己基碳二亚胺，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OH与N-羟基丁二酰亚胺或对硝基苯酚、二环己基碳二亚胺的摩尔比为1:1.0～1.5:1.2～1.5，室温搅拌反应5～6小时，过滤除去固体不溶物，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu的四氢呋喃溶液或Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-COOSu的1,4-二氧六环溶液。

6、合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-OH