[发明专利]一种四川省松茸的产地属性DNA指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及中国四川松茸主产区的松茸产地属性的DNA指纹图谱的建立方法，以及由该方法所得相应的DNA指纹图谱。

背景技术

松茸隶属担子菌门（Basidiomycota）、担子菌纲（Basidiomycetes）、伞菌目（Agaricales）、口蘑科（Tricholoma）、口蘑属（Tricholoma）^[1]。全球已报道了15个种，我国已记载了5个种一个变种，即松茸（T.matsutake）、假松茸（T.bakamatsukake）、青岗覃（T.quercicola）、粗壮口蘑（T.robustum）、黄褐口蘑（T.fulvoeastaneum）和台湾松茸变种（T.matsutake），松茸是一种外生菌根真菌类，由菌丝体、子实体和孢子组成，本发明所指的松茸是T.matsutake这个品种，且指可食用的子实体部分，也就是人们在市场上见到的松茸菌。

松茸是一种味道鲜美、口感上乘、气味浓郁独特、营养价值高、具有食疗效果的纯天然食用菌。目前尚不能人工驯化栽培，基本上都野生菌，所以来自不同分布区域的松茸拥有产地属性。本发明只针对新鲜松茸，松茸加工制品中，DNA可能发生断裂和降解，且目前多数松茸加工品不具有产地属性，没有对其进行产地溯源的需要。

日本是松茸的最大消费国，也是最大的进口国。我国松茸主要出口至日本，其中鲜松茸的出口量占日本进口量的43%，具有巨大的海外贸易价值。

我国松茸的主产区是云南、四川、吉林和黑龙江，其中云南的产量最大，吉林和黑龙江第二，四川第三。

目前东北生产的鲜松茸从吉林口岸出口，云南、四川和西藏鲜松茸从云南出入境口岸出口，但有时东北产的松茸也会从云南口岸出口。因此做好松茸的资源保护以及针对性出口管理，对松茸出口产业事关重大。

中国四川地区的松茸的多分布在甘孜州和凉山州的海拔为3000-4000米的原始森林区。交通不便，气候寒冷，人烟稀少，多是高山少数名族居住于附近。目前多是由当地高山贫困少数民族开始对其进行采摘并卖给当地的松茸出口收购商，这已成为这些少数民族特别是藏族和彝族脱贫致富的主要经济来源。因此，松茸的顺利出口关系到这些少数民族的经济收入，关系到此地民族的团结和政治稳定。

松茸虽然是纯天然的野生食用菌，但是生长地分散，采摘人员多半是居住于附近的当地居民——散户，从采撷到出口还要经历很多环节，面对出口国特别是日本苛刻的进口食品贸易壁垒，检验检疫部门必须对松茸的采摘到出口的全过程进行质量安全控制和溯源管理，尽可能保证松茸的顺利出口。另外，日本也要求我国提供对日出口的松茸的官方原产地证明。

中国国家质量监督检验检疫总局制定了《出口鲜松茸质量安全控制要求》指出“在强化检验把关中指出“指导出口企业避免从农残和重金属污染严重的地区收购原料，降低农残和重金属含量超标的风险”。虽然检验检疫监督管理部门按照溯源管理措施，要求企业对产地进行编号管理，按照原料来源分产地加工、存储堆放，在报检时必须提供该批出口松茸原料溯源管理网络图，但实际情况是企业履行得并不严格，这给经出口口岸检验检疫部门检验发现残留监控不合格的松茸的溯源造成困难，为了保护云南口岸出口的持续性，以及更有效、更有针对性对某个地区进行松茸质量的管理，管理监管部门除了依靠企业诚信备案登记外，还需要能识别松茸的产地属性的技术手段，用于区别产地来自云南以及产地来自非云南的松茸货品。

中国整个西南地区的松茸外观相近，气味相同，微有口感上的差异，且不同成熟期松茸子实体外观会发生变化，受此影响，仅从感官判断不易辨别产地。王明富等研究者就认为中国西南地区的松茸和日本的松茸即使地理跨度较大，但形态接近，菌丝体不拮抗，属同一品系的松茸。

以松茸含有的总蛋白以及多糖类进行分析，这些营养物质在松茸的不同成熟期表达量的不同，受此影响，由此得到的化学分析数据不能用于产地溯源。

相对于感官以及营养成分的分析，遗传物质的特性不会随着菌体生长而发生显著改变，相对于一个个体，遗传物质从幼到老基本都是稳定的。

但沙涛等认为滇产松茸的IGS1-RFLP与日产松茸的主要类型十分相似，认为滇产的和日产的松茸可能是同源的。