[发明专利]一种用于新城疫病毒class I检测的荧光定量RT-PCR试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于新城疫病毒class I检测的实时荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征在于包含：上游引物CNPIF：SEQ ID NO.1,下游引物CNPIR：SEQ ID NO.2,以及TaqMan探针CNPIP：5′-JOE-CGGATGAAAGGGGAGAATGCC-TAMRA-3′。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包含10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷、10⁸拷贝/μL的NP基因阳性质粒作为标准品模板。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于所述的NP基因阳性质粒是以pGEM-T载体为出发载体，在其EcoR V位点插入序列如SEQ ID NO.4所示的NP基因所得。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述的试剂盒还包含TaqMan Universal PCR Master Mix Kit为美国ABI公司产品。

5.权利要求1所述的试剂盒在实时荧光定量检测新城疫病毒class I中的应用。

6.一种实时荧光定量检测新城疫病毒class I的方法，将标准品模板和待测样品RNA模板分别置于各自的反应体系中，并同时置入PCR仪进行扩增，扩增完毕后由PCR仪自动得出检测结果，其特征在于其中

进入PCR仪的标准品模板的反应体系为25μl：其中ABI TaqMan Universal PCR Master Mix加入量为12.5μl,模板加入量为3μl，上游引物和下游引物在体系中的终浓度均为0.5μmol/L,探针在体系中的终浓度为0.5μmol/L，其余为无菌去离子水；

进入PCR仪的待测样品DNA模板的反应体系为25μl：其中ABI TaqMan Universal PCR Master Mix加入量为12.5μl,模板加入量为3μl，上游引物和下游引物在体系中的终浓度均为0.5μmol/L,探针在体系中的终浓度为0.5μmol/L，其余为无菌去离子水；

其中所述的上游引物为CNPIF：SEQ ID NO.1,下游引物为CNPIR：SEQ ID NO.2,探针为CNPIP：5′-JOE-CGGATGAAAGGGGAGAATGCC-TAMRA-3′；

PCR仪中的反应程序为：95℃预变性10min,然后95℃15s,60℃1min43个循环；荧光信号的收集及数据的采集定在60℃。检测结束,根据噪音情况设定和调整基线及阈值,并利用随机软件进行分析,建立标准曲线，根据荧光曲线和Ct值判断结果。