[发明专利]一种乳铁蛋白及乳过氧化物酶的纯化方法

权利要求书

1.一种乳铁蛋白及乳过氧化物酶的纯化方法，其特征在于，其是以含有重组人乳铁蛋白的乳样为原料，通过预处理得到脱脂乳，再将所获得的脱脂乳进行阳离子交换层析分离，并去除内毒素，然后分别在不同盐浓度条件下将乳铁蛋白与乳过氧化物酶洗脱分离，得到高纯度的乳铁蛋白及乳过氧化物酶，进一步通过疏水互作色谱将重组人乳铁蛋白与动物内源乳铁蛋白分离，最后对纯化的蛋白纯品进行浓缩脱盐。

2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述预处理为通过蝶式离心机进行脱脂，再利用0.14μm～1.4μm膜技术进行除菌，得到无菌脱脂乳。

3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述阳离子交换层析的阳离子交换树脂的粒径大小范围为90μm～300μm，线性流速为50cm/h～300cm/h，而后通过疏水互作色谱疏水互作色谱进行分离纯化，配基密度范围为20～50μmol，线性流速为50cm/h～100cm/h。

4.根据权利要求3所述的纯化方法，其特征在于，所述阳离子交换层析为在1～10mM EDTA，2～6ms/cm，pH5～7.5的磷酸盐缓冲液平衡离子交换层析柱上样后，用8～15ms/cm的NaCl或KCl缓冲液洗脱乳过氧化物酶，用170ms/cm以下的NaCl或KCl缓冲液单独洗脱乳铁蛋白。

5.根据权利要求4所述的纯化方法，其特征在于，所述阳离子交换层析为在2～6ms/cm,pH5～7.5的磷酸盐缓冲液平衡离子交换层析柱上样后，用9～15ms/cm的NaCl或KCl缓冲液中洗脱乳过氧化物酶，使用126ms/cm的NaCl或KCl缓冲液单独洗脱乳铁蛋白。

6.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述的疏水互作色谱为上样到电导100-160ms/cm的硫酸铵，20-50mM，pH6.5-7.5磷酸盐缓冲液平衡的疏水互作层析柱，包括Phenyl、Butyl和Octyl所有不同基质的疏水介质，优化Phenyl，流速为78-160cm/h，而后使用电导为50-70ms/cm的硫酸铵+20-50mM，pH6.5-7.5磷酸盐缓冲液单一洗脱重组人乳铁蛋白，使用电导为6ms/cm以下的20-50mM，磷酸盐缓冲液单一洗脱动物内源乳铁蛋白。

7.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述去除内毒素为采用浓度为0.1%～2%的非离子去污剂与浓度为1mM～10mM的金属络合剂相结合去除乳铁蛋白纯品中的内毒素。

8.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，所述蛋白浓缩脱盐为将纯化得到的乳铁蛋白与乳过氧化物酶使用50kD以下的膜进行蛋白质浓缩脱盐。

9.利用权利要求1-8任一项所述的纯化方法得到的乳铁蛋白在抗菌产品生产中的应用。

10.利用权利要求1-8任一项所述的纯化方法得到的乳过氧化物酶在抗氧化产品生产中的应用。