[发明专利]一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法

权利要求书

1.一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

（1）原料预处理

将新鲜乳猪皮100份，去除皮下脂肪，用料液比为1∶5-20（w/v），体积浓度为30%-60%单一脱脂剂处理24-48h，伴随间歇性功率为50-200W超声波每作用10-30min停5-20min，重复5-10次，中途换液3-5次，自来水冲洗，加入料液比为1∶1.5-4（w/v），体积浓度为0.5%-3%脱毛剂，保持温度为25-45，℃转动30-60min进行脱毛，然后将皮切碎，加入料液比为1∶10-40（w/v），浓度为0.05-0.5M/L非胶原蛋白去除剂，搅拌处理24-48h，中途换液3-5次，自来水冲洗，调节pH至7.5-9.0，再用料液比为1∶6-15（w/v），体积浓度为20-50%复合脱脂剂处理24-48h，伴随间歇性功率为50-200W超声波每作用10-30min停5-20min，重复5-10次，中途换液3-5次，蒸馏水浸洗，测定脂肪含量为0.3%～0.5%，产物作为胶原提取原料；

（2）未变性天然胶原的提取

将上述预处理所得的乳猪皮加入浓度为0.1-2M/L乙酸溶液和浓度为1wt%-5wt%提取剂，搅拌提取2-3天，获得未变性乳猪皮胶原溶液；

（3）未变性天然胶原的纯化

将上述未变性乳猪皮胶原溶液用8000-20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上清液中加入0.5-3M/L的NaCl盐析，沉淀经离心后用0.05-1M/L的乙酸溶解，如此反复盐析操作2-4次，再以浓度为0.1-1M/L的乙酸溶液为透析液透析处理2-3天，冻干，得到海绵状乳猪皮胶原；

（4）以上步骤中除特殊说明外，均在温度15℃以下进行。

2.如权利要求1所述从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，其特征在于单一脱脂剂为AXAUT-50或AXAUT AP，复合脱脂剂为AXAUT-50或AXAUT-AP中的任一种与异丙醇或丙酮中的任一种的组合。

3.如权利要求1所述从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，其特征在于脱毛剂为蛋白酶Buzyme7703、蛋白酶Nowolase NG或蛋白酶Basozyme L10中的任一种。

4.如权利要求1所述从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，其特征在于非胶原蛋白去除剂为磷酸盐缓冲液、脱氧胆酸钠或牛磺胆酸钠中的任一种。

5.如权利要求1所述从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，其特征在于提取剂为酸性蛋白酶或真菌复合酶。