[发明专利]一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，属于生物医用材料的制备领域。

背景技术

未变性天然胶原仍保持其独特的三股螺旋结构，呈右手超螺旋结构，分子结构为独特的甘氨酸-X-Y(X、Y为其他种类的氨基酸，多为脯氨酸、羟脯氨酸)周期结构。主要分布于皮肤、骨、角膜、肌腱等部位，具有人工合成高分子所不可媲美的低抗原性、良好的生物相容性和生物降解性等功能，其应用已广泛渗透到烧创伤、矫形以及硬组织修复等领域。

未变性天然胶原的广泛应用必然导致其需求量愈来愈大，对其品质的要求也愈来愈高。从哺乳动物皮如猪皮、牛皮中提取的胶原具有较好的耐酶、耐热稳定性和机械性能，因此哺乳动物皮仍是目前胶原制备的主要原材料。

然而，传统胶原制备仅局限于以成年哺乳动物皮为原材料，缺乏对于幼年哺乳动物皮胶原制备的研究。尽管，有文献探讨了增龄性改变对于牛皮胶原理化性质的影响（张文熊、武芳、戴晓涛，《胎牛及成牛皮胶原性质的研究》，中国皮革，2008，1(37):32-34）。但是，关于猪皮胶原的提取和性质研究主要集中在生长年龄6个月以上的成年猪，国内外尚缺乏关于乳猪皮胶原制备的研究。

并且，通过附图1中组织切片图a从上往下：可以发现乳猪皮有较成年猪皮更薄的表皮层，约为成年猪皮表皮层厚度的1/2，预处理不当很容易造成真皮层胶原纤维的损伤。其乳头层的毛囊周围分布有发达的脂肪锥和脂腺，毛囊位置较深但针毛短。脱毛时，脱毛剂需穿过或破坏很厚的脂肪锥内的细胞层才能达到毛根，进而削弱毛囊和毛根的联系使毛脱落。其真皮层的胶原纤维不具有固定的织形，胶原纤维束比成年猪皮的细小，纤维束间的间隙比成年猪皮胶原大，已公开发表的文献中的处理方法易造成乳猪皮胶原纤维的破坏。且其真皮层中的脂肪含量与成年猪皮相当，接近15%，脂肪的大量存在严重影响化学药品的渗透，因此仅通过单纯的化学试剂脱脂很难较好的去除脂肪，将不利于脱毛处理，进而严重影响胶原的提取率和品质。

鉴于乳猪皮组织结构与成年猪皮的差异性，现有从陆生动物组织中提取未变性天然胶原的制备方法并不适用于制备未变性天然乳猪皮胶原。本专利得到的胶原提取率高达50%以上，而成年猪皮胶原提取率仅为30%（赵帅，《猪皮的不同脱脂方法对胶原提取率的影响》，中国皮革,2007,9(36):33-36）。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足而提供一种从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法，特点是将乳猪皮进行脱脂、脱毛和去除非胶原蛋白组分，使脂肪含量低于0.5%、灰分含量低于0.3%，组织切片显示已无针毛、绒毛；胶原提取率高于50%；获得的海绵状乳猪皮胶原具有较高的纯度。

本发明的目的由以下技术措施实现，其中所述原料除特殊说明外，均为重量份数。

从乳猪皮中制备未变性天然胶原的方法包括以下步骤：

（1）原料预处理

将新鲜乳猪皮100份，去除皮下脂肪，用料液比为1∶5-20（w/v），体积浓度为30%-60%单一脱脂剂处理24-48h，伴随间歇性功率为50-200W超声波每作用10-30min停5-20min，重复5-10次，中途换液3-5次，自来水冲洗，加入料液比为1∶1.5-4（w/v），体积浓度为0.5%-3%脱毛剂，保持温度为25-45℃，转动30-60min进行脱毛，然后将皮切碎，加入料液比为1∶10-40（w/v），浓度为0.05-0.5M/L非胶原蛋白去除剂，搅拌处理24-48h，中途换液3-5次，自来水冲洗，调节pH至7.5-9.0，再用料液比为1∶6-15（w/v），体积浓度为20-50%复合脱脂剂处理24-48h，伴随间歇性功率为50-200W超声波每作用10-30min停5-20min，重复5-10次，中途换液3-5次，蒸馏水浸洗，测定脂肪含量为0.3%～0.5%，产物作为胶原提取原料；

（2）未变性天然胶原的提取

将上述预处理所得的乳猪皮加入浓度为0.1-2M/L乙酸溶液和浓度为1wt%-5wt%提取剂，搅拌提取2-3天，获得未变性乳猪皮胶原溶液；

（3）未变性天然胶原的纯化

将上述未变性乳猪皮胶原溶液用8000-20000rpm高速离心机分离，除去滤渣，上清液中加入0.5-3M/L的NaCl盐析，沉淀经离心后用0.05-1M/L的乙酸溶解，如此反复盐析操作2-4次，再以浓度为0.1-1M/L的乙酸溶液为透析液透析处理2-3天，冻干，得到海绵状乳猪皮胶原；

（4）以上步骤中除特殊说明外，均在温度15℃以下进行。