[发明专利]一种金黄色葡萄球菌特异性显色培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物鉴定用培养基，特别涉及一种金黄色葡萄球菌特异性显色培养基。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)是人类的一种重要的致病菌，属于葡萄球菌属(Staphyloccocus spp)，可引起多种组织器官的化脓性炎症，产毒株金黄色葡萄球菌可引起食物中毒，其危害仅次于副溶血弧菌和沙门氏菌。因此，如何快速、准确、特异地从含有大量其它细菌的食品等样品中分离且鉴别出金黄色葡萄球菌具有重要的现实意义。

目前对金黄色葡萄球菌的检测以选择性培养基为主。GB、SN、FDA及ISO等标准中关于金黄色葡萄球菌检验中，选择性培养基为Baird-Parker琼脂，在该培养基上金黄色葡萄球菌呈现黑色菌落，周围有透明圈。事实上一些非金黄色葡萄球菌如：腐生葡萄球菌、缓慢葡萄球菌及赛氏葡萄球菌等也能表现出金黄色葡萄球菌的性状，造成假阳性现象。虽然近年来已有一些基于分子生物学和免疫学的快速检测方法出现，可以区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌，但在应用方面存在一定局限性，一方面，这些方法不能直接用于目标菌的检测，另一方面，这些方法需要专业的技术人员或者昂贵的仪器，使其应用受到了很大的限制。相比较，利用酶活性检测鉴别细菌是一种有效的方法，这种技术可以定量并初步鉴定目标菌，且操作简便，大幅度提高了工作效率。

近年来，随着特异性酶显色技术的发展，通过显色培养基技术来快速鉴定微生物，已经成为新的发展方向，通过往分离培养基中添加细菌特异性酶显色底物，可以直接通过菌落颜色对菌株进行分离及初步鉴定，减少大量可疑菌株后续的生化鉴定步骤，节省时间，大大提高检测效率。目前关于金黄色葡萄球菌鉴定的显色培养基存在一定的缺陷，不能较好的区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌。例如，WO2000053799A1描述了一种金黄色葡萄球菌显色培养基，该培养基利用金黄色葡萄球菌能产生碱性磷酸酶，不能产生β-葡萄糖苷酶的特性，在培养基中添加两种相应的底物，以特异性选择金黄色葡萄球菌，但是这种培养基不能区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌，从而导致假阳性。CN102177249A和CN1518602A中描述的利用金黄色葡萄球菌特异性酶α﹣葡糖苷酶底物的显色培养基，但是这种培养基仍不能很好的区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌，从而导致假阳性。

目前用于金黄色葡萄球菌分离和检测的培养基技术瓶颈在于，特异性较差，不能较好的区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌，金黄色葡萄球菌检测容易造成假阳性。

发明内容

针对上述的现有技术所面临的问题，本发明的目的在于提供一种显色培养基，一方面解决现有显色培养基不能很好区分金黄色葡萄球菌和其它葡萄球菌的缺陷；另一方面可以使金黄色葡萄球菌显色快，显色效果好，更容易对金黄色葡萄球菌进行检测。

本发明所采取的技术方案是：

一种金黄色葡萄球菌特异性显色培养基，含有碳源、氮源、酵母粉、琼脂、杂菌生长抑制剂、NaCl、金黄色葡萄球菌生长促进剂，培养基中还添加有碱性磷酸酶、α-D-半乳糖苷酶和β-D-葡萄糖醛酸苷酶的特异性酶显色底物，以及可选的助显色剂。

作为本发明的进一步改进，每1000mL培养基含有蛋白胨6～11g、大豆蛋白胨4～7g、酵母粉4～7g、丙酮酸钠7～12g、氯化钠15～30g、琼脂粉10～20g、适量杂菌生长抑制剂。

作为本发明的进一步改进，每1000mL培养基含有蛋白胨6～11g、大豆蛋白胨4～7g、酵母粉4～7g、丙酮酸钠7～12g、氯化钠15～30g、琼脂粉10～20g、氯化锂8～15g、放线菌酮5～8mg、多粘菌素B5～9mg、甲磺酸去铁胺20～50mg、头孢克肟0.02～0.05mg、萘啶酮酸6～10mg、特异性酶混合显色底物和助显色剂，余量为水。

作为本发明的进一步改进，上述培养基中使用的特异性酶显色底物选自磷酸酯二钠盐、α-D-吡喃半乳糖苷、-β-D-吡喃葡萄糖醛酸苷、β-吡喃葡萄糖苷酶、β-吡喃岩藻糖苷的各种显色基团的衍生物。

作为本发明的进一步改进，上述培养基中使用的特异性酶显色底物选自5-溴-6-氯-3-吲哚基磷酸酯二钠盐、5-溴-4-氯-3--α-D-吡喃半乳糖苷和5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖醛酸苷。

作为本发明的进一步改进，上述培养基中使用的助显色剂选自麦芽糖、固红紫色LB盐、固红3GL盐、硫酸镁、氯化铁和过氧化月桂酰。