[发明专利]一种4-氨基苄基磷酸二乙酯完全抗原的制备方法有效
申请号: | 201310606470.8 | 申请日: | 2013-11-25 |
公开(公告)号: | CN103613659A | 公开(公告)日: | 2014-03-05 |
发明(设计)人: | 张振斌;侯玉文;田云霞;李克锦;刘萍;栾大伟 | 申请(专利权)人: | 博奥赛斯(天津)生物科技有限公司 |
主分类号: | C07K14/765 | 分类号: | C07K14/765;C07K14/77;C07K14/795;C07K14/47;C07K1/107 |
代理公司: | 天津滨海科纬知识产权代理有限公司 12211 | 代理人: | 李莉华 |
地址: | 300300 天*** | 国省代码: | 天津;12 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 氨基 苄基 磷酸 二乙酯 完全 抗原 制备 方法 | ||
1.一种4-氨基苄基磷酸二乙酯完全抗原的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将4-氨基苄基磷酸二乙酯溶于去离子水制备抗原溶液,戊二醛溶于去离子水制备桥联剂溶液,载体蛋白溶于pH9.6的0.05M碳酸盐缓冲液制备载体蛋白溶液;
(2)将载体蛋白溶液和桥联剂溶液混合并4℃避光搅拌30分钟;
(3)用0.01M磷酸盐缓冲液透析或者超滤除去载体蛋白溶液和桥联剂溶液混合液中游离的桥联剂,得到活化后的载体蛋白溶液;
(4)抗原溶液缓慢滴入活化后的载体蛋白溶液中,4℃搅拌20小时以上,经透析、脱盐或者超滤除去游离抗原,得偶联物;
(5)加NaBH4溶液还原偶联物。
2.根据权利要求1所述的一种4-氨基苄基磷酸二乙酯完全抗原的制备方法,其特征在于,步骤(1)中,所述载体为含有游离氨基的蛋白大分子。
3.根据权利要求1所述的一种4-氨基苄基磷酸二乙酯完全抗原的制备方法,其特征在于,所述的蛋白大分子为牛血清白蛋白或者卵清蛋白或者牛丙种球蛋白或者钥孔血蓝蛋白。
4.根据权利要求1所述的一种4-氨基苄基磷酸二乙酯完全抗原的制备方法,其特征在于,所述步骤(1)中,所述抗原溶液浓度为10mmol/L,载体蛋白溶液浓度为0.5mmol/L载体蛋白溶液,桥联剂溶液溶液浓度为50mmol/L。
5.根据权利要求1所述的一种4-氨基苄基磷酸二乙酯完全抗原的制备方法,其特征在于,所述步骤(2)中按照4-氨基苄基磷酸二乙酯与载体蛋白摩尔比10-20:1的比例。
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