[发明专利]一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管及其使用方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：包括用于装入待测血清标本的待测血清标本腔（1）及检测试剂腔，所述检测试剂腔包括：

用于装入裂解缓冲液的裂解缓冲液腔（2），

用于装入核酸提取磁珠的核酸提取磁珠腔（4），

用于装入核酸提取洗涤液的核酸提取洗涤液腔（3），

用于装入核酸提取洗脱液的核酸提取洗脱液腔（5），

用于装入荧光定量PCR反应液的荧光定量PCR反应液腔（6），

以及用于装入PCR反应引物和探针的PCR反应引物和探针腔（7）；

所述PCR反应引物的序列为：

HBV1:5'-CGCACCTCTCTTTACG-3’；

HBV2:5'-GGTGAAGCGAAGTGC-3’；

所述探针的序列为：

HBV-P:5'-CCGTCTGTGCCTTCTCATCT-3’。

2.根据权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述裂解缓冲液为含有异硫氰酸胍的缓冲液。

3.根据权利要求2所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述裂解缓冲液包括以下组分：浓度为2mol/L的异硫氰酸胍、浓度为20×10^-3mol/L的柠檬酸钠、浓度为0.1mol/L的β-巯基乙醇、质量分数为0.5%的十二烷基肌酸钠、pH值为5.5的Tris-HCl缓冲液和浓度为10×10^-3mol/L的溶剂。

4.根据权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述核酸提取磁珠为含有磁性纳米微球的溶液。

5.根据权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述核酸提取洗涤液包括以下组分：浓度为0.1mol/L的甘氨酸、质量分数为0.01%的ProClin300系列防腐剂、pH值为5.5的Tris-HCl缓冲液和浓度为10×10^-3mol/L的溶剂。

6.根据权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述核酸提取洗脱液包括以下组分：浓度为150×10^-3mol/L的氯化镁水溶液、浓度为50g/L的牛血清白蛋白、pH值为8.5的Tris-HCl缓冲液和浓度为10×10^-3mol/L的溶剂。

7.根据权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述荧光定量PCR反应液包括以下组分：含有2.5U的PCR反应Taq酶的4倍浓度PCR反应缓冲液。

8.根据权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述裂解缓冲液腔（2）内装有100μL的裂解缓冲液，

核酸提取磁珠腔（4）内装有10μL的核酸提取磁珠，

核酸提取洗涤液腔（3）内装有300μL的核酸提取洗涤液，

核酸提取洗脱液腔（5）内装有20μL的核酸提取洗脱液，

荧光定量PCR反应液腔（6）内装有10μL的荧光定量PCR反应液，

PCR反应引物和探针腔（7）内装有10μL的PCR反应引物和探针，

其中，PCR反应引物和探针的浓度分别为0.8μmol/L和0.4μmol/L。

9.根据权利要求1至8任意一项所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，其特征在于：所述每个腔之间通过105℃热封闭分离。

10.权利要求1所述一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管的使用方法，其特征在于：依次包括以下步骤：

步骤一、全自动快速乙型肝炎病毒核酸提取纯化程序：

将50～100μL的待测血清标本装入待测血清标本腔，将全自动快速核酸检测试剂管放入全自动核酸检测仪；

所述待测血清标本与裂解缓冲液腔（2）内的裂解缓冲液混合均匀，样本血清释放核酸，时间30秒，得到混合液A；

然后混合液A与核酸提取磁珠腔（4）内的核酸提取磁珠混合均匀，核酸与磁珠结合，时间30秒，得到混合液B；

全自动核酸检测仪步进电机挤压混合液B移去裂解液杂质，结合核酸的磁珠与核酸提取洗涤液腔（3）内的核酸提取洗涤液混合均匀，洗涤纯化核酸，时间40秒，得到混合液C；

全自动核酸检测仪步进电机挤压混合液C移去洗涤液，结合核酸的磁珠与核酸提取洗脱液腔（5）内的核酸提取洗脱液混合均匀，核酸自磁珠上分离至核酸提取洗脱液中，时间20秒，得到混合液D；

步骤二、乙型肝炎病毒快速荧光定量PCR反应程序：

通过全自动核酸检测仪步进电机的挤压，将含有混合液D与荧光定量PCR反应液腔（6）内的荧光定量PCR反应液、PCR反应引物和探针腔（7）内的PCR反应引物和探针混合均匀,实施快速荧光定量PCR反应,控制温度在95℃下2分钟，进行预变性，再进行40个循环变温过程：先控制温度在95℃下4秒，再控制温度在60℃下8秒，此为一个循环变温过程；其中单个循环升、降温时间均为4秒。