[发明专利]一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管及其使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种乙型肝炎病毒(HBV)的全自动快速核酸检测试剂管，还涉及该种乙型肝炎病毒(HBV)的全自动快速核酸检测试剂管的使用方法。

背景技术

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）属嗜肝DNA病毒科(hepadnaviridae)，主要侵犯肝细胞，在肝细胞内定居复制并损害肝细胞，引起肝细胞炎症、坏死、纤维化。我国目前乙肝病毒携带率为7.18%，其中约三分之一有反复肝损害，表现为活动性的乙型肝炎或者肝硬化。乙型肝炎病毒基因组长约3.2kb，为部分双链环状DNA，共有四个开放读框，分别编码病毒的Core核衣壳蛋白和S包膜蛋白，病毒复制酶（聚合酶)及一种与病毒基因表达有关的蛋白质X。

乙型肝炎病毒基因检查的实验室诊断主要依赖于血清特异性抗原抗体（ELISA）检测和基因（DNA）检测。ELISA方法是临床诊断HBV感染的传统手段，反映机体HBV感染的免疫状态。而乙型肝炎病毒基因(DNA)检测则是采用聚合酶链反应（PCR）技术，特异性扩增乙肝病毒基因组片段，以近于2n的指数（n为循环次数），在数小时内可将极微量的乙肝病毒基因(DNA)特定的分子片断扩增至1×10⁷～1×10⁸倍，大大提高了乙型肝炎病毒的检出率，PCR技术相对于ELISA方法，灵敏度高，特异性强，而且不受免疫学方法的“窗口期”限制影响，为临床诊断HBV感染提供了一种强有力的手段。

然而，随着PCR等分子诊断技术在临床检验方面的推广应用，其局限性也日益显现。主要表现在两个方面，一是由于常规PCR技术的高灵敏度，极易因微量样品污染产生假阳性结果，因此常规PCR检测对操作人员的素质和操作环境都要求较高，按照卫生部的标准，国内医院如在临床检验项目上开展运用常规PCR技术，必须建立专用的PCR实验室，并对操作人员进行专业培训后才能进行，这必然提高了PCR检测的使用成本。二是目前在做PCR反应检测之前，仍需依靠传统的手工方式将临床样本中的核酸提取纯化，然后再与PCR试剂混合进行检测反应，程序繁琐，耗时耗力，这在一定程度上限制了PCR检测在临床诊断方面，特别是对大批量样本检测时的普及运用。

针对常规PCR技术的局限性，近年来出现了运用新兴的纳米核酸磁珠技术自动化提取生物样本中的核酸，并联机荧光定量PCR反应仪，实现从核酸提取到PCR反应的全自动核酸提取扩增系统。目前已有Roche、Cepheid、IQuum等公司出一管式全自动核酸提取扩增仪器，利用这些仪器平台的全自动病原体核酸检测技术能够将核酸提取到PCR反应的过程在一根检测管内的全自动完成，极大地提高工作效率，有效地消除了假阳性污染风险，日益成为医学分子诊断领域新的发展方向。

发明内容

本发明所要解决的技术问题就是提供一种操作简单、反应快速、灵敏度高的乙型肝炎病毒(HBV)的全自动快速核酸检测试剂管。

本发明的另一目的是提供该种乙型肝炎病毒(HBV)的全自动快速核酸检测试剂管的使用方法。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：一种乙型肝炎病毒的全自动快速核酸检测试剂管，包括用于装入待测血清标本的待测血清标本腔及检测试剂腔，所述检测试剂腔包括：

用于装入裂解缓冲液的裂解缓冲液腔，

用于装入核酸提取磁珠的核酸提取磁珠腔，

用于装入核酸提取洗涤液的核酸提取洗涤液腔，

用于装入核酸提取洗脱液的核酸提取洗脱液腔，

用于装入荧光定量PCR反应液的荧光定量PCR反应液腔，

以及用于装入PCR反应引物和探针的PCR反应引物和探针腔；

所述PCR反应引物的序列为：

HBV1:5'-CGCACCTCTCTTTACG-3’；

HBV2:5'-GGTGAAGCGAAGTGC-3’；

所述探针的序列为：

HBV-P:5'-CCGTCTGTGCCTTCTCATCT-3’。

优选的，所述裂解缓冲液为含有异硫氰酸胍的缓冲液。

优选的，所述裂解缓冲液包括以下组分：浓度为2mol/L的异硫氰酸胍、浓度为20×10^-3mol/L的柠檬酸钠、浓度为0.1mol/L的β-巯基乙醇、质量分数为0.5%的十二烷基肌酸钠、pH值为5.5的Tris-HCl缓冲液和浓度为10×10^-3mol/L的溶剂。其中，溶剂为生理盐水或其他适于配制裂解缓冲液的溶剂。

优选的，所述核酸提取磁珠为含有磁性纳米微球的溶液。