[发明专利]一株短小芽孢杆菌、该菌株的获取方法及该菌株在烟草特有亚硝胺定向降解中的应用

权利要求书

1.一株短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）05-5402，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，其保藏编号为CGMCC No.7418。

2.如权利要求1所述的短小芽孢杆菌，其特征在于所述菌株可在以4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮为唯一碳源和氮源的培养基中生长。

3.如权利要求1或2所述的短小芽孢杆菌，其特征在于所述菌株对调制或制丝过程烟叶或烟丝中NNN、NNK、NAB和NAT的总降解率为12.2~17.3%。

4.一种权利要求3所述的短小芽孢杆菌的获取方法，包括分离、筛选及纯化工序，具体包括：

A、分离：将烟株组织或植烟土壤研磨后加入无菌水，于室温下振荡提取25~35min，得到提取悬浊液，将提取悬浊液用稀释平板的方法分离能在分离培养基上生长的菌株；

培养条件为：25~30℃，时间40~55h；

分离培养基成分以g/L计为：琼脂12.0~18.0、K₂HPO₄ 1.4~1.8、KH₂PO₄ 0.3~0.5、NaCl 0.08~0.12、MgSO₄·7H₂O 0.1~0.3、CaCl₂ 0.04~0.06、MnSO₄·H2O 0.001~0.003、CuSO₄·5H₂O 0.0001、ZnSO₄·7H₂O 0.0002、NaMoO₄·2H₂O 0.0002、尼古丁0.8~1.2，pH 6.5~7.5；

B、筛选：将分离出的菌株转接到筛选培养基平板上，得到一菌落长势旺盛的细菌菌株；

培养条件为：25~30℃，时间40~55h；

筛选培养基成分以g/L计为：琼脂12.0~18.0、K₂HPO₄ 1.4~1.8、KH₂PO₄ 0.3~0.5、NaCl 0.08~0.12、MgSO₄·7H₂O 0.1~0.3、CaCl₂ 0.04~0.06、MnSO₄·H2O 0.001~0.003、CuSO₄·5H₂O 0.0001、ZnSO₄·7H₂O 0.0002、NaMoO₄·2H₂O 0.0002、NNK 0.8~1.2，pH 6.5~7.5；

C、纯化：将筛选出的菌株用纯化培养基平板进行划线纯化，获得长势旺盛的单菌落，即短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）05-5402；

培养条件为：25~30℃，时间40~55h；

纯化培养基成分以g/L计为：蛋白胨8.0~12.0、牛肉浸膏2.0~4.0、NaCl4.0~6.0、琼脂15.0~19.0，pH7.0~7.5。

5.如权利要求4所述的获取方法，其特征在于步骤A所述的烟株组织为烤烟K326的叶片或茎。