[发明专利]一种表皮细胞富集仪及其动态富集方法

权利要求书

1.一种表皮细胞富集仪，其特征在于：包括底座，以及设置在底座上的控制面板、消化容器、过滤容器、混合容器、控制单元、加热器、振动器、传感器和电源，其中，控制面板包括显示屏和按键，振动器安装在消化容器的底部，使消化容器产生一定频率的振动；加热器安装在消化容器的外表面上，用于加热消化容器内的液体，温度传感器安装在消化容器上，用于监测消化容器的加热温度，上述加热器、振动器分别与控制单元的输出端相连，控制面板和传感器器分别与控制单元的输入端相连，电源分别为控制面板、控制单元、加热器和振动器供电。

2.如权利要求1所述的一种表皮细胞富集仪，其特征在于：上述消化容器的侧壁上设有一通孔，用于安装温度传感器。

3.如权利要求1所述的一种表皮细胞富集仪，其特征在于：上述过滤容器的上端设有滤网，用于过滤动态消化后的溶液，滤网的目数为20-60。

4.如权利要求1所述的一种表皮细胞富集仪，其特征在于：上述消化容器、过滤容器和混合容器的入口部以及控制面板分别安装在底座的上表面上；上述底座上表面上进一步设有一操作台。

5.如权利要求1所述的一种表皮细胞富集仪，其特征在于：控制单元、电源和振动器分别安装在底座的下表面上，振动器的顶部与消化容器的底部相接触；所述振动器采用振动电机。

6.一种表皮细胞动态富集方法，其特征在于：包括预处理、消化、过滤和配液，具体步骤为：

（1）预处理：取表皮，在表皮细胞富集仪的操作台上制成若干块表皮片；

（2）消化：启动表皮细胞富集仪电源，取步骤（1）所得表皮片置于消化容器中，加入消化酶，通过控制单元控制振动器和加热器，进行动态消化，得细胞悬液；

（3）过滤：将步骤（2）所得细胞悬液滴入过滤容器进行过滤，去除表皮残渣，下层的细胞液用于配液；

（4）配液：将过滤所得细胞液滴入混合容器，与蛋白凝胶混合，混合均匀完成配液。

7.如权利要求6所述的一种表皮细胞动态富集方法，其特征在于：上述步骤（1）中，所取的表皮为断层皮片，断层皮片为厚度为0.3-0.6mm的中厚皮片，制得的每块表皮片的粒径在1-5mm。

8.如权利要求6或7所述的一种表皮细胞动态富集方法，其特征在于：上述步骤（2）中，1-2 cm² 断层皮片加4-6ml的消化酶，所述消化酶由胰酶和EDTA配制而成，其中，胰酶在消化酶中的质量浓度为0.25-0.5%，EDTA在消化酶中的质量浓度为0.01-0.05%；动态消化前先静置5-7分钟，再启动振动器，进行动态消化3-7分钟后，再静置5-7分钟，再启动振动器，恒温下循环2-5次，整个过程加热器将温度控制在36.8-37.5℃，循环结束后进行细胞冲刷；细胞冲刷采用的试剂为PBS、标准生理盐水或格林氏液中的任一种，以细胞完全冲出消化容器为止。

9.如权利要求6所述的一种表皮细胞动态富集方法，其特征在于：在步骤（4）中，下层细胞液在蛋白凝胶混合前，先添加抑制剂形成细胞悬液，抑制剂为自体血清或大豆胰蛋白酶，每5-15ml下层细胞液中自体血清添加1-3滴，大豆胰蛋白酶的添加量为下层细胞液的0.8-3倍。

10.如权利要求9所述的一种表皮细胞动态富集方法，其特征在于：在步骤（4）中，蛋白凝胶为纤维蛋白胶，混合过程为分别将细胞悬液与促凝剂、纤维蛋白胶混合：促凝剂和纤维蛋白胶先进行预混合，再将细胞悬液和促凝剂/纤维蛋白胶灌入双筒注射器的不同筒中，在同样压力作用下，细胞悬液和促凝剂/纤维蛋白胶同时挤出，混合均匀完成配液，纤维蛋白胶与促凝剂的总量和细胞悬液等量。