[发明专利]一种表皮细胞富集仪及其动态富集方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞富集仪及其富集方法，特别是涉及一种表皮细胞富集仪及其动态富集方法。

背景技术

近年来，我国烧伤的发病率为总人口的2‰～10‰，每年发生烧伤者近千万人，需要住院治疗的达数十万人之多，烧伤治愈后常遗留大量疤痕，对患者的外貌、体型，以及功能、心理方面造成负面影响。

目前，利用有限的皮源对较大面积的烧伤创面进行治疗，主要有两种：

1、微粒皮技术：将有限的自体皮源使用物理方法进行分散成尽量小的微粒，然后回植到病人的创面上，这种技术可将皮片扩大10～20倍，但使用该物理方法一方面很难将皮片进一步扩大，另一方面表皮贴附率低，难以保证疗效；

2、RECELL技术：因为创面的关闭是通过表皮干细胞的增殖完成，RECELL技术是将基底层表皮细胞进行静态消化，然后利用喷雾法将表皮细胞喷洒于创面，使用该技术理论上可将皮片扩大40～80倍，表皮干细胞主要存在于基底层中，因此，这种技术主要是利用表皮干细胞来修复创面。采用静态消化主要存在如下缺陷：消化酶与底物之间混合欠佳，消化时间长，且消化不均匀。

有鉴于此，本发明人对此进行研究，专门开发出一种表皮细胞富集仪及其动态富集方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的是提供一种表皮细胞富集仪及其动态富集方法，采用动态消化方式取得高密度、有活力的表皮细胞，且整个过程消化时间短，消化均匀。

为了实现上述目的，本发明的解决方案是：

一种表皮细胞富集仪，包括底座，以及设置在底座上的控制面板、消化容器、过滤容器、混合容器、控制单元、加热器、振动器、传感器和电源等，其中，控制面板包括显示屏和按键，振动器安装在消化容器的底部，使消化容器产生一定频率的振动；加热器安装在消化容器的外表面上，用于加热消化容器内的液体，温度传感器安装在消化容器上，用于监测消化容器的加热温度，上述加热器、振动器分别与控制单元的输出端相连，控制面板和传感器器分别与控制单元的输入端相连，电源分别为控制面板、控制单元、加热器和振动器供电。

上述消化容器的侧壁上设有一通孔，用于安装温度传感器。

上述过滤容器的上端设有滤网，用于过滤动态消化后的溶液，滤网的目数为20-60。

上述消化容器、过滤容器和混合容器的入口部以及控制面板分别安装在底座的上表面上。

上述底座上表面上进一步设有一操作台，用于表皮消化前的剪切等预处理。

所述振动器采用振动电机。

控制单元、电源和振动器分别安装在底座的下表面上，振动器的顶部与消化容器的底部相接触。

一种表皮细胞动态富集方法，包括预处理、消化、过滤和配液，具体步骤为：

（1）预处理：取表皮，在表皮细胞富集仪的操作台上制成若干块表皮片；

（2）消化：启动表皮细胞富集仪电源，取步骤（1）所得表皮片置于消化容器中，加入消化酶，通过控制单元控制振动器和加热器，进行动态消化，得细胞悬液；

（3）过滤：将步骤（2）所得细胞悬液滴入过滤容器进行过滤，去除表皮残渣，下层的细胞液用于配液；

（4）配液：将过滤所得细胞液滴入混合容器，与蛋白凝胶混合，混合均匀完成配液。

作为优选，上述步骤（1）中，所取的表皮为断层皮片，断层皮片为厚度为0.3-0.6mm的中厚皮片，制得的每块表皮片的粒径在1-5mm。

作为优选，上述步骤（2）中，消化酶的添加比例为：每1-2 cm² 断层皮片加4-6ml的消化酶，所述消化酶由胰酶和EDTA配制而成，其中，胰酶在消化酶中的质量浓度为0.25-0.5%，EDTA在消化酶中的质量浓度为0.01-0.05%；动态消化前先静置5-7分钟（也可称为静态消化），再启动振动器，进行动态消化3-7分钟后，再静置5-7分钟，再启动振动器，恒温下循环2-5次，整个过程加热器将温度控制在36.8-37.5℃，循环结束后进行细胞冲刷；细胞冲刷采用的试剂为PBS、标准生理盐水或格林氏液中的任一种，以细胞完全冲出消化容器为止。

作为优选，在步骤（4）中，下层细胞液在蛋白凝胶混合前，先添加抑制剂形成细胞悬液，抑制剂优选为自体血清或大豆胰蛋白酶，每5-15ml下层细胞液中自体血清添加1-3滴（每15滴为1ml），大豆胰蛋白酶的添加量为下层细胞液的0.8-3倍。