[发明专利]乙醇分级沉淀法稳定肝素钠精品抗Xa因子活性的方法

权利要求书

1.一种乙醇分级沉淀法稳定肝素钠精品抗Xa因子活性的方法，其特征在于：采用盐解-酶解相结合的工艺，反复调节氯化钠和酶的加入量，精制工序，调节乙醇沉淀度数，对产品进行不同程度分离，控制效价。

2.根据权利要求1所述的乙醇分级沉淀法稳定肝素钠精品抗Xa因子活性的方法，其特征在于所述乙醇分级沉淀法包括如下步骤：

一、提取

1、粗品溶解：

开启水阀，加入一定量饮用水，再将肝素钠粗品加入到反应罐中，边搅边加，按原料与饮用水1∶(6-7)比例溶解，搅拌5-10小时后，用搅拌棒试底部是否全部溶解；

2、酶解：

将上一步溶解液，先用盐酸溶液调PH7.0-8.0，升温至50-55℃之间时加入胃蛋白酶5-10g/亿单位，再加入10-20g/亿单位胰酶，50-55℃保温2-4小时；

3、急升温：

将上一步酶解液在30～40分钟内升温至85-90℃，静止10-30分钟，开搅拌，通入循环水降温，待温度降至50-55℃时，用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH10.0-12.0，静止分层20-30小时；

4、底部沉淀的杂质离心：

虹吸上清，用40-100目滤袋过滤，过滤后的溶液分为上清液和下层沉淀，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液；

二、精制

1、第一次沉淀：

待上述上清液和离心液温度降至20-30℃，加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸将滤液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10-12小时；

2、第一次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5％双氧水，氧化10-12小时；

3、第二次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10-12小时；

4、第二次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5％双氧水，氧化10-12小时；

5、第三次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10-12小时；

6、第三次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5％双氧水，氧化10-12小时；

7、第四次沉淀：上一步溶液若有沉淀物析出，则用离心机离心，没有析出则直接加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH6.0-7.0，将溶液放冷库中冷冻至-10℃--5℃，边搅边加-10℃--5℃的丙酮，使得丙酮占溶液的质量百分含量为40-45％，-5℃-0℃保温24-30小时，然后将废丙酮弃去，多硫酸软骨素被丙酮带走，留底部沉淀物用纯化水溶解，溶液再加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加乙醇，使乙醇浓度在20℃时为45-50％，沉淀10-12小时；

8、将沉淀物用纯化水按2-5L/亿单位溶解后，用孔径0.22-0.3微米滤膜板框机微滤，用乙醇沉淀，使乙醇浓度达75-80％，再加入23-26％的氯化钠溶液，每1升溶液加6-10ml氯化钠溶液，静止沉淀10-12小时；

9、将上层乙醇弃去，加入无水乙醇脱水，边搅边加，使乙醇浓度为97-99％，静止24-30小时，弃去上层乙醇，将不锈钢砂芯棒放在产品中，用真空泵通过管道和过滤瓶把剩余乙醇抽干，待干燥；

10、将抽干的产品均匀放置在不锈钢盘中，放在真空干燥箱中抽真空，用循环水加温，温度35-60℃，烘干70-80小时；

11、包装：将产品取出，称重，使每包装袋5kg，用封口机封口，放在铝桶中待验。