[发明专利]乙醇分级沉淀法稳定肝素钠精品抗Xa因子活性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及稳定肝素钠中抗Xa因子活性的方法。 

背景技术

肝素钠是从猪小肠粘膜中提取的一种生化药品，是手术中不可替代的、挽救生命的、市场不能断档的首选药物。自二十世纪四十年代用于临床以来，其应用范围不断扩大，尤其是二十世纪九十年代以来，该产品临床主要用于防止血栓形成，治疗心血管病、血液病、尿毒症等。西方国家已开始研究肝素钠对癌症的防治作用，其新用途不断增加。 

进入二十世纪七十年代以来，我国肝素钠生产工艺不断改进，成为世界肝素钠产量最大的国家。国际市场的肝素钠产品有70％以上来自中国。肝素钠精品生产已由高锰酸钾氧化法发展到双氧水氧化法，结合醇洗分离法，将大量的杂质用乙醇带走。 

发明内容

本发明提供了一种乙醇分级沉淀法稳定肝素钠精品抗Xa因子活性的方法，是为了满足美国客户对我公司提出：抗Xa因子活性必须在100％以上，效价大于180u/mg的要求，采用盐解-酶解相结合的工艺，反复调节氯化钠和酶的加入量，精制工序，调节乙醇沉淀度数，对产品进行不同程度分离，控制效价，从而实现用乙醇分级沉淀法将肝素钠进行不同程度分离，控制效价，稳定了肝素钠精品抗Xa因子活性。 

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案予以实现： 

一种乙醇分级沉淀法稳定肝素钠精品抗Xa因子活性的方法，其特征在于：采用盐解-酶解相结合的工艺，反复调节氯化钠和酶的加入量，精制工序，调节乙醇沉淀度数，对产品进行不同程度分离，控制效价。 

在发明的技术方案中，还具有以下技术特征：所述乙醇分级沉淀法包括如 下步骤： 

一、提取 

1、粗品溶解： 

开启水阀，加入一定量饮用水，再将肝素钠粗品加入到反应罐中，边搅边加，按原料与饮用水1∶(6-7)比例溶解，搅拌5-10小时后，用搅拌棒试底部是否全部溶解； 

2、酶解： 

将上一步溶解液，先用盐酸溶液调PH7.0-8.0，升温至50-55℃之间时加入胃蛋白酶5-10g/亿单位，再加入10-20g/亿单位胰酶，50-55℃保温2-4小时； 

3、急升温： 

将上一步酶解液在30～40分钟内升温至85-90℃，静止10-30分钟，开搅拌，通入循环水降温，待温度降至50-55℃时，用2-6mol/L氢氧化钠溶液调PH10.0-12.0，静止分层20-30小时； 

4、底部沉淀的杂质离心： 

虹吸上清，用40-100目滤袋过滤，过滤后的溶液分为上清液和下层沉淀，留上清液待沉淀，下层沉淀放离心机离心，离心后留上层离心液； 

二、精制 

1、第一次沉淀： 

待上述上清液和离心液温度降至20-30℃，加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸将滤液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10-12小时； 

2、第一次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5％双氧水，氧化10-12小时； 

3、第二次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，搅拌溶解后，用盐酸溶液调将溶液PH6.0-7.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10-12小时； 

4、第二次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠 溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5％双氧水，氧化10-12小时； 

5、第三次沉淀：溶液加入20-30g/L氯化钠，用盐酸溶液将溶液调PH10.0-12.0，边搅边加浓度为95～97％的乙醇溶液，使得乙醇的浓度在20℃时达到45～50％，沉淀10-12小时； 

6、第三次氧化：弃去上层废乙醇，下层沉淀物用纯化水溶解，用氢氧化钠溶液将溶液调PH10.0-12.0，然后加入体积3-5％双氧水，氧化10-12小时；