[发明专利]一种利用数字PCR检测食品中大肠菌群数量的方法无效
| 申请号： | 201310613503.1 | 申请日： | 2013-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN103667463A | 公开（公告）日： | 2014-03-26 |
| 发明（设计）人： | 陈爱亮;吴英;蒋小玲;吕珍珍;刘金钏;杨曙明 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/10;C12Q1/06 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 数字 pcr 检测 食品 大肠菌 数量 方法 | ||
1.数字PCR方法在检测食品中大肠菌群数量中的应用。
2.一种利用数字PCR检测食品中大肠菌群数量的方法，包括如下步骤：
（1）富集待测食品中的细菌，将富集物与DNA结合物共同孵育，获得PCR扩增模板；
所述DNA结合物为不能穿过完整的细胞膜，但能与细胞膜受损后暴露出来的DNA结合的物质；
（2）配制PCR反应体系，进行数字PCR反应；所述PCR反应体系中含有步骤（1）获得的PCR扩增模板、大肠菌群通用引物对、荧光染料、dNTP和DNA聚合酶；
（3）根据步骤（2）数字PCR反应产生的荧光信号，计算得到所述待测食品中的大肠菌群数量。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述大肠菌群通用引物对为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1，或者由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述DNA结合物为叠氮溴化丙锭或叠氮溴化乙锭。
5.根据权利要求2-4中任一所述的方法，其特征在于：所述荧光染料为SybGreen或EvaGreen。
6.根据权利要求2-5中任一所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，进行所述数字PCR反应时的退火温度为58℃。
7.一种利用数字PCR检测食品中大肠菌群数量的试剂盒，包括如下物质：
（a）引物对；所述引物对为由序列表中序列1和序列2所示的两条单链DNA分子组成的引物对1，或者由序列表中序列3和序列4所示的两条单链DNA分子组成的引物对2；
（b）DNA结合物；所述DNA结合物为不能穿过完整的细胞膜，但能与细胞膜受损后暴露出来的DNA结合的物质。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述DNA结合物为叠氮溴化丙锭或叠氮溴化乙锭。
9.根据权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括荧光染料；
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述荧光染料为SybGreen或EvaGreen。
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