[发明专利]一种生长激素释放因子衍生物的合成方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种多肽的合成方法，特别涉及一种生长激素释放因子类似物的合成方法，更具体而言，涉及CJC-1295的合成方法。

背景技术

生长激素释放因子（GRF）（也称为生长激素释放激素（GHRH））是由下丘脑的弓状核产生的一种含有44个氨基酸的肽激素，GRF刺激生长激素从脑垂体分泌。已发现GRF的活性部分为含有29个氨基酸的长肽，并将其命名为GRF_(1-29)。

CJC-1295是由加拿大ConjuChem公司发明的一种长效GRF类似物，

与原GRF_(1-29)肽序相比，CJC-1295分别用D-Ala、Gln、Ala和Leu替换第2、8、15和27位的氨基酸。通过如此修饰可得到更稳定的肽：第2位氨基酸的替换可防止DPP-IV酶的降解，第8位氨基酸替换可减少天冬酰胺的重排或氨基水解形成天冬氨酸，第15位氨基酸的替换可增强生物活性，第27位氨基酸的替换可防止Met的氧化。此外，通过在GRF上修饰药物亲和复合物(DAC)，可延长其半衰期。与传统GRF相比，CJC-1295的半衰期可延长到7天以上。

CJC-1295具有与人类生长激素（HGH）相同的功效。它可以提高肌肉质量、增加骨密度、改善蛋白质合成、增加IGF-1水平、增强免疫系统等等。另外，CJC-1295还可以促进慢波睡眠（深度睡眠），慢波睡眠有利于肌肉生长维持最佳水平，同时有利于记忆的保存。由于CJC-1295具有较长的半衰期及较好的稳定性，因此成为目前研究的热点。

关于合成CJC-1295的一般方法，参见Bioorg.Med.Chem.Lett.14(2004)841–845；Endocrinology,July2005,146(7):3052–3058。其中，在Fmoc/tBu固相多肽合成法中由Fmoc-Lys(Alloc)-OH为初始分子逐一偶联氨基酸，然后通过Pd(0)/冰醋酸/N-甲基吗啉/氯仿去除烯丙氧羰基保护基（Alloc），再偶联3-马来酰亚胺基丙酸(MPA)，该方法采用的脱保护试剂Pd(0)/冰醋酸/N-甲基吗啉/氯仿较昂贵，不利于大规模生产。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供CJC-1295的固相合成方法，该方法的原料易得、成本较低而且脱保护基的方式与现有技术相比较更易于工作操作。本发明的合成CJC-1295的方法包括下述步骤：

（1）以氨基树脂为载体与Fmoc-Lys(Tfa)-OH合成Fmoc-Lys(Tfa)-树脂，然后采用固相多肽合成方法将其从C端到N端逐一偶联上待偶联的氨基酸，得到肽树脂A:

Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-L eu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(Ot Bu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Tfa)-树脂；

（2）用氨水和DMF的混合物将步骤（1）中得到的肽树脂A上的Lys的保护基团去除，得到肽树脂B：

Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-L eu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(Ot Bu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys-树脂；

（3）通过缩合剂将3-马来酰亚胺基丙酸与所述肽树脂B偶联，得到肽树脂C：

Boc-Tyr(tBu)-dAla-Asp(OtBu)-Ala-Ile-Phe-Thr(tBu)-Gln(Trt)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Val-Leu-Ala-Gln(Trt)-L eu-Ser(tBu)-Ala-Arg(Pbf)-Lys(Boc)-Leu-Leu-Gln(Trt)-Asp(Ot Bu)-Ile-Leu-Ser(tBu)-Arg(Pbf)-Lys(MPA)-树脂；

（4）将肽树脂C裂解、脱除保护基得到CJC-1295：