[发明专利]表皮细胞的动态富集方法

权利要求书

1.表皮细胞的动态富集方法，其特征在于，包括预处理、消化和配液，具体步骤为，

（1）预处理：取表皮，制成若干块表皮片；

（2）消化：取步骤（1）所得表皮片置于消化容器中，加入消化酶，进行动态消化，得细胞悬液；

（3）配液：将消化所得细胞悬液与蛋白凝胶混合，混合均匀。

2.如权利要求1所述的表皮细胞的动态富集方法，其特征在于：步骤（1）中，所取的表皮为断层皮片，每块表皮片的粒径在1-5mm。

3.如权利要求2所述的表皮细胞的富集及应用，其特征在于：所述的断层皮片的厚度为0.3-0.6mm的中厚皮片。

4.如权利要求1所述的表皮细胞的动态富集方法，其特征在于：步骤（2）中，每1-2 cm² 断层皮片添加4-6ml的消化酶，所述的消化酶中包括胰酶和EDTA，其中，胰酶在消化酶中的质量浓度为0.25-0.5%，EDTA在消化酶中的质量浓度为0.01-0.05%；动态消化在恒温条件下进行，由交替进行的静置和动态两种状态组成，动态消化完成后进行细胞冲刷，获得细胞悬液。

5.如权利要求4所述的表皮细胞的动态富集方法，其特征在于：交替进行的每对静置、动态构成一个循环，动态消化时，先静置5-7分钟，再进入动态，动态保持3-7分钟后，每个动态消化包括2-5个循环，温度恒定控制在35-38℃。

6.如权利要求4或5所述的表皮细胞的动态富集方法，其特征在于：所述的动态时确保消化容器内物质的转速为60-300rpm；细胞冲刷采用的试剂为PBS、标准生理盐水或格林氏液中的任一种，以细胞完全冲出消化容器为止。

7.如权利要求6所述的表皮细胞的动态富集方法，其特征在于：所述的动态时确保消化容器内物质的转速180-300rpm。

8.如权利要求1所述的表皮细胞的动态富集方法，其特征在于：步骤（3）与步骤（2）之间，至少还需进行一次过滤，过滤的目数为20-60，去除表皮残渣，而下层细胞液中添加抑制剂，形成细胞悬液，其中，抑制剂为自体血清或大豆胰蛋白酶，每5-15ml下层细胞液中自体血清的添加1-3滴，大豆胰蛋白酶的添加量为下层细胞液的0.8-3倍。

9.如权利要求1所述的表皮细胞动态富集方法，其特征在于，步骤（3）中，蛋白凝胶为纤维蛋白胶，细胞悬液与蛋白凝胶的混合过程为：分别将细胞悬液与促凝剂、纤维蛋白胶混合，所述的促凝剂和纤维蛋白胶先进行预混合，每5-10ml纤维蛋白胶中添加促凝剂1-3滴，再将细胞悬液和促凝剂/纤维蛋白胶灌入双筒注射器的不同筒中，在同样压力作用下，细胞悬液和促凝剂/纤维蛋白胶同时挤出，纤维蛋白胶与促凝剂的总量和细胞悬液等量，混合均匀完成配液。

10.如权利要求1所述的表皮细胞动态富集方法，其特征在于：所述的预处理、消化和配液是在表皮动态消化仪或生物培养用摇床上进行的，表皮细胞动态消化仪包括底座，以及设置在底座上的控制面板、消化容器、过滤容器、混合容器、控制单元、加热器、振动器、传感器和电源，其中，控制面板包括显示屏和按键，振动器安装在消化容器的底部，使消化容器产生一定频率的振动；加热器安装在消化容器的外表面上，用于加热消化容器内的液体，温度传感器安装在消化容器上，用于监测消化容器的加热温度，上述加热器、振动器分别与控制单元的输出端相连，控制面板和传感器器分别与控制单元的输入端相连，电源分别为控制面板、控制单元、加热器和振动器供电。