[发明专利]一种基因敲入重组载体及其制备方法和小鼠模型制备方法有效
| 申请号： | 201310617760.2 | 申请日： | 2013-11-27 |
| 公开（公告）号： | CN103642828A | 公开（公告）日： | 2014-03-19 |
| 发明（设计）人： | 沈月雷 | 申请（专利权）人： | 北京百奥赛图基因生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12Q1/66;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京市百伦律师事务所 11433 | 代理人： | 周红力;姜莹 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区经济*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基因 重组 载体 及其 制备 方法 小鼠 模型 | ||
1.一种用于基因敲入的重组载体，其特征在于，所述重组载体包含DNA片段结构IL17A-IRES-luc；
其中，IL17A为白细胞介素17A的编码基因，IRES为内部核糖体进入位点，luc为分泌型荧光素酶的编码基因。
2.根据权利要求1所述的重组载体，其中，所述重组载体是将DNA片段结构IRES-luc导入表达载体pIL17A-GFP得到的。
3.根据权利要求1或2所述的重组载体，其中，所述分泌型荧光素酶选自由Gaussia荧光素酶、Gaussia-Dura荧光素酶、Cypridina荧光素酶、Green Renilla荧光素酶和Red Firefly荧光素酶所组成的组。
4.根据权利要求3所述的重组载体，其中，所述分泌型荧光素酶为Gaussia荧光素酶。
5.根据权利要求2或4所述的重组载体，其中，所述表达载体pIL17A-GFP从5’末端至3’末端的结构包括：5’端IL17A基因的同源臂序列，转录终止序列SV40 polyA，5’端Cre酶识别位点LoxP，PGK启动子序列，新霉素磷酸转移酶编码序列Neo，转录终止序列polyA，3’端Cre酶识别位点LoxP，3’端IL17A基因的同源臂序列，负筛选标记基因的编码核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的重组载体，其中，所述DNA片段结构IRES-luc导入表达载体pIL17A-GFP的位点位于5’端IL17A基因的同源臂序列和转录终止序列SV40 polyA元件之间。
7.根据权利要求1、2、4或6所述的重组载体，其中，所述重组载体具有SEQ ID NO：1所示的碱基序列。
8.权利要求1-7中任意一项所述的重组载体的制备方法，其中，该方法包括将DNA片段结构IRES-luc导入表达载体pIL17A-GFP中。
9.一种小鼠模型制备方法，该方法包括将权利要求1-7中任意一项所述的重组载体转染进C57BL/6胚胎干细胞中并筛选获得阳性重组胚胎干细胞，用所述阳性重组胚胎干细胞获得F1代杂合子小鼠，使雌雄F1代杂合子小鼠交配获得F2代小鼠，并在F2代小鼠中筛选出携带有所述重组载体的纯合子IL17A-luc模型小鼠。
10.一种检测根据权利要求9所述的制备方法制备获得的小鼠模型中IL17A基因表达情况的方法，该方法包括对小鼠模型的血液和/或尿液中分泌型荧光素酶的含量进行检测。
11.一种IL17A-luc模型小鼠在与IL17A基因表达相关的研究中的应用。
12.一种IL17A-luc模型小鼠在筛选可诱导IL17A基因表达的药物中的应用。
13.一种IL17A-luc模型小鼠在筛选可抑制IL17A基因表达的药物中的应用。
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