[发明专利]植物重组几丁质酶蛋白及其制备方法

权利要求书

1.植物重组几丁质酶蛋白，其特征在于：所述蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.根据权利要求1所述植物重组几丁质酶蛋白制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）植物重组几丁质酶基因的克隆及测序；

（2）表达载体的构建与鉴定；

（3）重组蛋白的融合表达；

（4）重组蛋白的鉴定；

（5）表达产物的可溶性分析；

（6）融合蛋白的纯化；

（7）植物重组蛋白的生物学活性检测。

3.根据权利要求2所述植物重组几丁质酶蛋白制备方法，其特征在于：所述步骤（1）包括如下步骤：

步骤1、利用十字花科植物几丁质酶基因的保守序列涉及特异性引物，以白菜基因组DNA为模板，通过PCR反应扩增出长度为1098bp的特异性DNA片段和长度150的几丁质酶基因5’端序列片段；

步骤2、利用不同浓度的水杨酸处理苗龄为5天的白菜植株，处理浓度为1 mmol/L、2.5 mmol/L、5 mmol/L、7.5mmol/L，以未处理的为对照组，分别在处理后8、112、16、20小时提取粗酶液并测定酶活力，选择其中酶活力最高的吹植株叶片提取叶片总RNA；

步骤3、利用Trizol试剂法提取提取经1 mmol/L水杨酸处理的白菜叶片总RNA，利用3’RACE技术扩增得到该几丁质酶基因全长1517bp序列；

步骤4、几丁质酶基因序列同源性比对和测序。

4.根据权利要求3所述植物重组几丁质酶蛋白制备方法，其特征在于：所述步骤4中几丁质酶基因核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。