[发明专利]重组长链人胰岛素样生长因子-I的制备方法

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白从N端到C端具有式I所示结构：

A-B-C-D-E-F 式I

式中，

A为硫氧还蛋白(Thioredoxin)元件(TRX)；

B为任选的第一连接肽元件；

C为纯化标签元件；

D为第二连接肽元件；

E为肠激酶识别位点元件(EK),并且所述的肠激酶识别位点元件为DDDDK；

F为胰岛素样生长因子衍生物LR³IGF-1元件；

“-”表示连接上述元件的肽键；

且所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.:2所示，其中：

第1-109位为Thioredoxin的氨基酸序列；

第110-116位为第一连接肽的氨基酸序列；

第117-122位为纯化标签HHHHHH的氨基酸序列；

第123-127位为第二连接肽的氨基酸序列；

第128-132为肠激酶识别位点DDDDK的氨基酸序列；

第133-215为LR³IGF1的氨基酸序列。

2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸编码权利要求1所述的融合蛋白。

3.如权利要求2所述的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸的序列如SEQ ID NO.:1或6所示。

4.一种载体，其特征在于，它含有权利要求2所述的多核苷酸。

5.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求4所述的载体或基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。

6.一种产生蛋白的方法，其特征在于，它包括步骤：

在适合表达的条件下，培养权利要求5所述的宿主细胞，从而表达出权利要求1所述的融合蛋白。

7.一种制备蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)用肠激酶对权利要求1所述的融合蛋白酶切，从而获得酶切产物，该酶切产物包括对应于F元件的胰岛素样生长因子衍生物LR³IGF-1；和

(ii)从酶切产物中分离或纯化出所述的胰岛素样生长因子衍生物LR³IGF-1。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(i)中进行酶切反应的条件包括：20IUEK/mg融合蛋白。