[发明专利]一种水母溶血毒素粗提物的制备方法有效
| 申请号： | 201310628068.X | 申请日： | 2013-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN103626861A | 公开（公告）日： | 2014-03-12 |
| 发明（设计）人： | 张黎明;郑杰民;常银龙;王涛;尹慢慢;柳国艳;王倩倩;周永红 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军第二军医大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C07K1/34 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 赵青 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 水母 溶血 毒素 粗提物 制备 方法 | ||
1.一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
A、以鲜活水母不含触手的口腕组织为原料，加入PBS缓冲液清洗；
B、振荡：加入与步骤A的口腕组织等体积的PBS缓冲液，在涡旋振荡器上以转速2000-3200rpm，振荡1-5min；
C、过滤：步骤B得到的内容物以100-500目筛网过滤，收集滤液；
D、透析：步骤C得到的滤液置于截留分子量为1000Da透析袋中，4℃下，用预冷的PBS缓冲液透析6-24h，然后4℃下3000-10000×g离心10-30min，收集上清液，即得水母溶血毒素粗提物。
2.根据权利要求1所述的一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，所述的步骤A中，挑选有活力、口腕发达的水母个体，以尼龙丝手抄网捕捞，捕捞的鲜活水母置于盛有海水的容器中，直至其恢复自然活动形态；分离不含触手的口腕组织，剪取口腕组织，分装到离心管中。
3.根据权利要求1或2所述的一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，所述的步骤A中，加入与口腕组织等体积的PBS缓冲液，摇动离心管，将上层清洗液倾尽。
4.根据权利要求1或2所述的一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，步骤B中在涡旋振荡器上以转速为3200rpm，振荡2min。
5.根据权利要求1或2所述的一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，步骤C中以300目筛网过滤，收集滤液。
6.根据权利要求1或2所述的一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，步骤D中用预冷的PBS缓冲液透析8h，4℃下10000×g离心10min。
7.根据权利要求1或2所述的一种水母溶血毒素粗提物的制备方法，其特征在于，所述的预冷的PBS缓冲液是指PBS缓冲液需经过孔径为0.20μm的微孔滤膜过滤，于4℃预冷。
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