[发明专利]一种重组古紫质4蛋白及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组古紫质4蛋白，其特征在于，所述重组古紫质4蛋白的编码核苷酸序列如SEQID NO.1所示，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种如权利要求1所述重组古紫质4蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)获得重组古紫质4蛋白的基因；

以含有AR4基因的质粒pUC19-AR4为模板，以5'-GCCAACAGCAGTGATGGACCCGATAG-3'(SEQID NO：4)和5'-GCCAAGCTTCTAGATCAGTCGCTG-3’(SEQ ID NO：5)为引物，通过PCR扩增得到DNA片段1，然后以DNA片段1为模板，以5'-ATGTTGGAGTTATTGCCAACAGCAGTG-3’(SEQ ID NO：6)和5'-GCCAAGCTTCTAGATCAGTCGCTG-3’(SEQ ID NO：5)为引物，通过PCR扩增得到重组古紫质4蛋白核苷酸序列，如SEQ ID NO.1所示；

(2)构建重组古紫质4蛋白的表达载体；

将步骤(1)得到的如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，与如SEQ ID NO.3所示的控制基因表达的启动子序列进行拼接；拼接后的序列通过5’端的BamHI和3’端的HindIII酶切位点与pUC19质粒连接，构建重组质粒pUC19-bAR；经BamHI和HindIII双酶切，转移到pXLNovR质粒上，构建形成表达载体pXLNovR-bAR质粒；

(3)获得重组古紫质4蛋白；

将pXLNovR-bAR质粒转入到宿主细胞嗜盐杆菌L33中进行蛋白表达，转化菌株在培养基中经培养后，分离纯化得到所述重组古紫质4蛋白。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法得到的重组古紫质4蛋白不含菌红素。

4.一种如权利要求1所述的重组古紫质4蛋白在固体核磁共振检测中的应用，其特征在于，通过在重组古紫质4蛋白的培养基中加入同位素标记的氨基酸进行培养，分离纯化得到同位素标记的重组古紫质4蛋白。