[发明专利]多肋藻配子体克隆杂交育苗技术

权利要求书

1.多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：可按如下步骤操作，

1)用无菌海水清洗带有孢子囊的多肋藻孢子体5次，剪切10×10 cm的组织块；

2)将组织块阴干处理2 h后，放入盛有无菌海水及载玻片的烧杯中，待其释放游孢子；

3)显微镜下观察到游孢子附着在载玻片后，取出载玻片放入新的盛有无菌海水的烧杯中，在适宜条件下培养；

4)待游孢子发育成配子体时，将其从载玻片上轻轻刮下并打碎，倒入锥形瓶中悬浮培养；

5)显微镜下可以区分雌、雄配子体后，利用毛细管分离出雌、雄配子体；

6)分别培养雌、雄配子体，形成肉眼可见的绒毛状，打碎、再次进行悬浮培养以获得大量雌、雄配子体；

7)取雌、雄配子体按1:1比例混合，倒入放有棕绳的烧杯中培养；

8)当棕绳上长出肉眼可见的小孢子体（长度约0.5-1cm）时，转移到海上暂养；

9)暂养一个月后，分苗，海上养殖5-6个月，获得成熟的多肋藻孢子体。

2.按照权力1所述多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：阴干处理条件为10 ℃黑暗条件下2 h。

3.按照权力1所述多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：无菌海水培养液的组成为200 μmol·L^-1 KNO₃，20 μmol·L^-1KH₂PO₄的无菌海水。

4.按照权力1所述多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：游孢子在培养皿中的培养附着条件为8 ℃、5 μmol·m^-2·s^-1，光周期为12：12 h (L:D)。

5.按照权力1所述多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：附着游孢子的培养条件为10 ℃、20 μmol·m^-2·s^-1，光周期为12：12 h (L:D)。

6.按照权力1所述多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：配子体悬浮培养条件为10 ℃、20 μmol·m^-2·s^-1，光周期为12：12 h (L:D)。

7.按照权力1所述多肋藻配子体克隆杂交育苗技术，其特征在于：取雌、雄配子体湿重各15 mg混合放入加有300 mL无菌海水和棕绳的烧杯中，培养条件为15 ℃、40 μmol·m^-2·s^-1，光周期为12：12 h (L:D)。