[发明专利]大兴安岭野生泽漆总黄酮的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从大兴安岭野生泽漆里提取总黄酮的新方法，特别是涉及一种利用超高压（离子液体作为溶剂）提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，高速逆流色谱分离纯化总黄酮的新方法。

背景技术

泽漆，别名五朵云、五风草，一年生或二年生草本。高10～30cm，无毛或仅分枝略具疏毛，基部紫红色，上部淡绿色。叶互生；倒卵形或匙形，长1～3cm，宽0.7～1cm，先端微凹，边缘中部以上有细锯齿，无柄。蒴果球形，直径约3mm，3裂，光滑。种子褐色，卵形，长约2mm，有明显凸起网纹，具白色半圆形种阜。含有黄酮类化合物槲皮素-3，5-二半乳糖甙，泽漆皂甙、泽漆醇。泽漆辛、苦、微寒,有毒；有利尿消肿、化痰散结、解毒杀虫之功效。中医及临床常用其治疗腹水、水肿、肺结核、痰多喘咳、癣疮等。

国内一般用有机溶剂提取法提取总黄酮，常用的有超声波提取，甲醇、乙醇溶剂提取法。近年来也有采用微波辅助离子液体法提取总黄酮，用大孔树脂进行纯化的报道。传统方法提取总黄酮需要几小时至十几小时，操作温度高且得率低，能耗大。

本发明的不同之处在于主要采用超高压技术（离子液体作为溶剂）提取，聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化。通过以上技术提取、纯化的总黄酮具有较强的抗氧化能力，产品不仅得率高，而且纯度高。采用HPLC法进行检测，含量最高可达98.3 %。

发明内容

本发明优点：提取快捷、产品纯度高，大大提高了提取速度，同时极大提高有效成分含量，克服了常规提取提取物纯度低、得率低的缺点。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种采用超高压提取技术（离子液体作为溶剂），聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下：

（1）超高压提取：泽漆全草切断，以不同浓度离子液体溶液为溶剂，在一定料液比、适当超高压力下处理几分钟；

（2）精滤处理：采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.1μm ，在一定温度和压力下精滤处理；

（3）聚酰胺树脂吸附及洗脱：

采用一定目数的聚酰胺粉末，控制上样液浓度，上样液体积,室温下以一定流速吸附饱和；解吸时先除杂，再用一定浓度的乙醇溶液解吸，控制流速,收集洗脱液，检测总黄酮含量；

（4）大孔树脂二次吸附及洗脱：

选用不同型号的大孔树脂（XAD-16、DM130、D312），控制上样液质量浓度，上样速率；先用2 BV去离子水冲洗树脂，再用不同浓度的乙醇溶液，以一定流速洗脱，收集洗脱液，检测总黄酮含量；

（5）真空冷冻干燥：收集总黄酮溶液， 在适当温度、干燥压力下冷冻干燥；

（6）分相：称取总黄酮提取物，选择HSCCC溶剂系统，按比例将各种溶剂加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置过夜。分相平衡后分出上相和下相；

（7）HSCCC分离纯化：以溶剂系统的上相为固定相，下相为流动相，调整转速，以一定流速泵入流动相，分离总黄酮提取物；

（8）检测.：采用高效液相色谱法，紫外检测器在一定波长进行检测，泽漆总黄酮纯度为95% 以上。

具体实施方式：

实施案例1：

一种采用超高压提取技术（离子液体作为溶剂），聚酰胺藕联大孔树脂吸附，再用高速逆流色谱分离纯化，得到高纯度总黄酮的新方法，其步骤如下：

（1）超高压提取：1kg泽漆全草切断，以50%浓度的1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐溶液为溶剂，料液比1:8，200-400 MPA压力下处理2min；

（2）精滤处理：收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，过滤精度0.1μm ，在60℃，0.2MPa压力下精滤处理；

（3）聚酰胺树脂吸附及洗脱：

采用80目的聚酰胺粉末，上样液浓度控制在0.5 mg/mL， 上样液体积2BV,室温下以2BV/h流速吸附饱和；解吸时先用2BV水除杂，再用75%乙醇解吸，洗脱体积为4BV ，流速2BV/h,收集洗脱液。经测定，总黄酮纯度为72.36% ；

（4）大孔树脂二次吸附及洗脱：

接着用DM130大孔树脂二次吸附纯化，上样液质量浓度为3mg/ml，上样速率2BV/h，上样体积4 BV/h；洗脱时先用2 BV去离子水冲洗树脂，再用80%浓度的乙醇溶液，以1BV/h流速洗脱，洗脱体积为5 BV；收集洗脱液，经测定，总黄酮纯度为81.29%，；